实验2 蛋白质的沉淀与透析.pptVIP

* * 实验二 蛋白质的沉淀与透析 生物化学实验之－－ 山东师范大学生命科学学院 【实验目的】 1. 学习蛋白质沉淀和透析的基本原理 2. 掌握蛋白质可逆沉淀、透析的基本操作方法 【实验原理】 某些试剂（如硫酸铵、氯化钠）与蛋白质作 用，可使蛋白质沉淀；但当除去使蛋白质沉淀的 因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中，这 种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。 一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等）或化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。即使除去了使蛋白质沉淀的因素，蛋白质也不能再溶于原来的溶剂中, 即为不可逆沉淀作用。 在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质（无机盐、单糖等）。利用透析膜的半透膜作用，小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶液进行物质交换，大分子物质（蛋白质）保留在透析袋中而彼此分离。 【实验步骤】 1. 蛋白质的检查 取卵清蛋白/NaCl溶液2ml和10%NaOH溶液1ml，摇匀，加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇。 2. 蛋白质的可逆沉淀作用 1） 球蛋白沉淀 取卵清蛋白/NaCl溶液2ml，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和硫酸铵溶液2ml，轻轻混匀，静置5min。 2）清蛋白沉淀 过滤，除去盐析出的蛋白质。 向滤液中加入硫酸铵粉末至饱和。 3. 蛋白质的透析 （1）装样：取一段透析袋，将一端夹住，由开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（不可装太满，并适当排出空气），夹住袋口。 （2）透析：取10倍以上蛋白质体积的去离子水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。在烧杯底部放一个磁子，缓慢搅拌以促进溶液交换。更换洗脱溶液数次（约30min一次），至达到透析平衡为止。