沙葱中黄酮类化合物的分离纯化、结构鉴定及其对小鼠免疫抗氧化机能影响的研究-动物营养与饲料科学专业毕业论文.docxVIP

内蒙宙农业大学博士学位论文摘 内蒙宙农业大学博士学位论文 摘 要 本文通过分离纯化沙葱中的黄酮类化合物，以昆明种小白鼠为动物模型，研 究饲喂沙葱黄酮对机体免疫及抗氧化能力的影响。试验共分三个部分： 第一部分试验确定沙葱黄酮最佳提取纯化条件，应用75％乙醇提取沙葱中黄酮 类化合物，提取温度为70℃、提取时间为2h／2次。应用聚酰胺层析柱分离纯化， 用30％、50％、70％和95％的乙醇溶液洗脱，用液相色谱一电喷雾离子化一质谱 串联技术(LC．ESI-MS．MS)鉴定沙葱黄酮的结构，结果如下：30％乙醇洗脱出8 种沙葱黄酮类化合物，分别是①由奈素．4’．O．3，7 O O二葡萄糖营(m／z609)、②槲 皮素．7．O．3．O．芸香糖苷(m／z609)、③山奈索-4-O 7 O葡萄糖．3．O．二葡萄糖苷 (m／z771)、④7．O．5，4’．二甲氧基．3，-羟基黄酮醇(m／z329)、⑤3’，4 7．环氧基 7 O 5． 甲氧基黄酮醇(m／z327)、⑥槲皮素 7 O 3．O．二葡萄糖营(m／z625)、⑦槲皮素 ．7．O．3．0．葡萄糖营(m／z463)、⑧山奈素．7．O．3．O．葡萄糖苷(m／z447)：50％乙醇洗 脱出7种沙葱黄酮类化合物，分别是①木犀草素．5’．O．葡萄糖4．羟基苯丙酸 (rrgz593)、②槲皮素．7。O．3．O．芸香糖苷(rrgz609)、③山奈素．4-0．3，7．O．O．二葡萄 糖营(rrgz609)、④7．O．5，40二甲氧基．3乙羟基黄酾醇(m／z329)、@3翟乙环氧基。7．O-5． 甲氧基黄酮醇(m／z327)、⑥槲皮素．7．O．3．O．葡萄糖苷(m／z463)；⑦山奈素．7．O．3．O． 葡萄糖苷(m／z447)；70％乙醇洗脱出3种沙葱黄酮类化合物，分别是①7．O．5，4乙 二早氧基．30羟基黄酮醇(m／z329)、②304’，3，4．露羟基．6．0。类黄酮(m／z 273)、@3’，4’． 环氧基．7．O．5．甲氧基黄酮醇(m／z327)；95％乙醇洗脱出2种沙葱黄酮类化合物， 分别是①3’，4’．环氧基 7 O 5．甲氧基黄酮醇(m／z327)、②7．O。5，4’．二甲氧基．3’．羟基 黄酮酵(m／z329)。 第二部分试验应用纯昆明种小自鼠480只(体重：20+_29)，随机分为4组， 每组120只(雌雄备半)，分笼饲养。第1组为对照组，第2组为添加75．36mg／kg．BW xt 沙葱组，第3组为添加75．36mg／kg·BW·d75％乙醇提取的沙葱总黄酮粗提物组， 根据预试验的结果第4组为添加75。36mg／kg·BW·d30％乙醇洗脱纯化焉沙葱黄酮 添加组，预饲期5d，正式试验期14d，正式试验期内2次宰杀采血并分离血清，剖 离肝脏、胸腺和脾脏称重。试验结束时，沙葱组和沙葱黄酮纯化组的血清T-SOD、 GSH．Px含量显著离子对照组和沙葱黄酮粗提物组(尹礁鲫，沙葱黄酮纯化组和 沙葱黄酮粗提物组的盘清CAT含量显著高于对照组(户蔹嗣易，试验备组的血清 MDA含量低于对照组，但差异不显著(尸统∞，试验组血清T-AOC含量显著高 于对照组(尸识蚴。试验组肝脏T-SOD含量显著高于对照组(尸礁彻，试验组 之间差异不显著(玲绞瀚，沙葱黄酮纯化维麴肝脏GSH-Px含量显著离予其它各 组(尸《统口毋，对照组、沙葱组和沙葱黄酮纯化组的肝脏CAT含量显著高于沙葱 黄酮糨提物组(尹该蚴，沙葱组和沙葱黄酮纯纯组肝脏MDA含量显著低于对照 黄酮糨提物组(尹该蚴，沙葱组和沙葱黄酮纯纯组肝脏MDA含量显著低于对照 组和沙葱黄酮粗提物组(尹矧鳓，沙葱黄酮纯化组肝脏T-AOC含量高于其它各 组，但差异不显著(胁玖彻。试验结果显示：沙葱黄酮可提高血清和肝脏中抗氧 化酶类的含量和活性，降低体内脂质过氧化产物的含量，从丽提高机体的抗氧化能 力。 第兰部分试验设计同第二部分，试验结束时，试验各组的脾脏指数高予对照组， 但差异不显著(尸织彻，沙葱黄酮纯化组胸腺指数显著高于其它各组(尸吼狮； 沙葱黄酮纯化组的血清ACP含量显著高于其它备组(夕礁05)，试验各组肝脏ACP 含量显著高于对照组(尸礁05)；试验各组碳廓清指数高于对照组，但差舜不显著 (尸玖彻，沙葱黄酮纯化组的吞噬指数、血清溶菌酶含量显著高于其它各组(尸 礁05)：沙葱黄酮纯化组血清lgG含量显著离于对照组(夕玖05)；沙葱黄酮纯 仡缰CDl9+细胞数量蔫于其它各组，僵差异不显著(盼缓鳓；沙葱黄酮纯化缓CD矿 细胞数量显著高于对照组和沙葱组(尸姐05)，对照组CD8+细胞数量高于其它各组 (尸n∞；试验组血清NO含量均高于对照组，其中沙葱黄酮粗提物组显著高于 对照缓和沙葱黄酮纯优组(尹黢狮，高于沙葱组僵差异不显著(尸及．彩)。试验 结果显示：沙葱黄酮纯化