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I螂㈣必解放军医学院
I螂㈣必
解放军医学院
研究生学位论文原创性声明
秉承我院“忠诚、敬业、和谐、创新”的学风,本人声明:所呈交的论文是 在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以 标注和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研 究成果,也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料,对本 文的研究作出贡献的个人或集体,均己在文中做了明确的说明并表示谢意。
申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。
日期:仉t∥‘/I
作教 签签
醐承视列 醐:协·6/6 f I
解放军医学院 研究生学位论文版权使用授权书
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论文作者签名:乃段碍艇 日期:强驴/f
,
指导教师签名:|fJ弦15琴 醐:-ip_f6乞1/6,//f6 f
万方数据
解放军医学院硕士学位论文目录
解放军医学院硕士学位论文
目录
缩略词表 一1
中文摘要 2
英文摘要 .5
前 言 8
第一部分Liraglufide对CMEC生物学特性的影响 11
1材料 .13
2方法 .15
3结果 .17
4讨论 .24
第二部分Liraglutide减轻CMEC氧化应激所致细胞凋亡的机制 27
l材料 .28
2方法 .31
3结果 .34
4讨{念 .49
参考文献 .55
文献综述 ..70
攻读学位期间发表文章情况 ..8l
致 谢 。82
万方数据
解放军医学院硕士学位论文缩略词表
解放军医学院硕士学位论文
缩略词表
万方数据
解放军医学院硕士学位论文作
解放军医学院硕士学位论文
作 者:张颖 学科专业:内科学(心血管病学) 导 师:陈韵岱
利拉鲁肽减轻心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制研究
中文摘要
目的:微血管是心脏终末循环的末梢,决定了组织灌注水平和氧供平衡。心 梗缺血后的再灌注时期产生的大量活性氧(Reactive oxygen species,RoS)是诱导 冠脉末梢的CMEC(Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMEC)凋亡的主要
因素之一。前期研究证实,黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,xO)是CMEC在
氧化应激条件下产生l的S的主要来源之一。如何减少CMEC的氧化应激损伤是防 治急性心肌梗死再灌注损伤的重点。胰高血糖素样肽-1(glucagon-likepeptide-1, GLP.1)近期被发现在心脏组织中具有抗氧化应激的作用。故本研究旨在探究
GLP.1类似物利拉鲁肽(GLP-l Analogue,Liraglutide)对CMEC生物学特性的 影响,以及缺氧复氧模型(Hypoxia/Reoxygenation Model,H/R)条件下,Liraglutide 保护CMEC免受氧化应激损伤的具体机制,以及提高CMEC的存活能力的分子信
号通路的研究。
方法:双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,差速贴壁法进行纯化,CD3l 和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定CMEC纯度,CD31和GLP.1R抗体进行 免疫细胞化学共染细胞。采用不同浓度Liraglutide(0~100nM)预干预后MTT绘 制细胞生长曲线,BrdU荧光标记法和划痕实验观察药物作用下细胞增殖和迁移能 力。建立H/R诱导的细胞氧化应激凋亡模型,流式细胞学检测细胞凋亡率, DCFHDA荧光探针检测胞内ROS的变化,Fura-3AM荧光探针检测细胞内钙离子 变化,免疫荧光染色和Western Blot检测XO、caspase3等蛋白分子的表达情况, 利用通路阻断剂和干扰RNA技术,阐明Liraglutide通过激活P13K/Akt—Survivin分 子信号在抗细胞氧化应激过程中的保护作用机制。
万方数据
解放军医学院硕士学位论文结果:
解放军医学院硕士学位论文
结果:
1.体外分离SD乳鼠原代CMEC,72 h后细胞呈典型“铺路石样”生长,CD31 及Ⅷ因子免疫荧光染色提示双阳性率大于95%,说明CMEC纯度较高。
2.CD3l和GLP.1R抗体免疫荧光共定位染色提示CMEC表达GLP.1受体, MTT示Liraglutide以浓度依赖方式促进CMEC的体外增殖。100 nM为其最适生 长浓度。
3.予以Liraglutide预处理细胞24 h,BrdU和划痕实验均说明Liraglutide能以 浓度依赖性促进CMEC的增殖和迁移能力。
4.通过缺氧4
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