利拉鲁肽减轻心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制研究-内科学(心血管病学)专业论文.docxVIP

利拉鲁肽减轻心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制研究-内科学(心血管病学)专业论文.docx

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I螂㈣必解放军医学院 I螂㈣必 解放军医学院 研究生学位论文原创性声明 秉承我院“忠诚、敬业、和谐、创新”的学风,本人声明:所呈交的论文是 在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以 标注和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研 究成果,也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料,对本 文的研究作出贡献的个人或集体,均己在文中做了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。 日期:仉t∥‘/I 作教 签签 醐承视列 醐:协·6/6 f I 解放军医学院 研究生学位论文版权使用授权书 本人保证毕业离院后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为解放军医 学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复 印件和电子版本,可以采用影印、缩印、扫描或其他手段保存论文以供被查阅和 借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。 论文作者签名:乃段碍艇 日期:强驴/f , 指导教师签名:|fJ弦15琴 醐:-ip_f6乞1/6,//f6 f 万方数据 解放军医学院硕士学位论文目录 解放军医学院硕士学位论文 目录 缩略词表 一1 中文摘要 2 英文摘要 .5 前 言 8 第一部分Liraglufide对CMEC生物学特性的影响 11 1材料 .13 2方法 .15 3结果 .17 4讨论 .24 第二部分Liraglutide减轻CMEC氧化应激所致细胞凋亡的机制 27 l材料 .28 2方法 .31 3结果 .34 4讨{念 .49 参考文献 .55 文献综述 ..70 攻读学位期间发表文章情况 ..8l 致 谢 。82 万方数据 解放军医学院硕士学位论文缩略词表 解放军医学院硕士学位论文 缩略词表 万方数据 解放军医学院硕士学位论文作 解放军医学院硕士学位论文 作 者:张颖 学科专业:内科学(心血管病学) 导 师:陈韵岱 利拉鲁肽减轻心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制研究 中文摘要 目的:微血管是心脏终末循环的末梢,决定了组织灌注水平和氧供平衡。心 梗缺血后的再灌注时期产生的大量活性氧(Reactive oxygen species,RoS)是诱导 冠脉末梢的CMEC(Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMEC)凋亡的主要 因素之一。前期研究证实,黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,xO)是CMEC在 氧化应激条件下产生l的S的主要来源之一。如何减少CMEC的氧化应激损伤是防 治急性心肌梗死再灌注损伤的重点。胰高血糖素样肽-1(glucagon-likepeptide-1, GLP.1)近期被发现在心脏组织中具有抗氧化应激的作用。故本研究旨在探究 GLP.1类似物利拉鲁肽(GLP-l Analogue,Liraglutide)对CMEC生物学特性的 影响,以及缺氧复氧模型(Hypoxia/Reoxygenation Model,H/R)条件下,Liraglutide 保护CMEC免受氧化应激损伤的具体机制,以及提高CMEC的存活能力的分子信 号通路的研究。 方法:双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,差速贴壁法进行纯化,CD3l 和Ⅷ因子抗体进行免疫细胞化学染色鉴定CMEC纯度,CD31和GLP.1R抗体进行 免疫细胞化学共染细胞。采用不同浓度Liraglutide(0~100nM)预干预后MTT绘 制细胞生长曲线,BrdU荧光标记法和划痕实验观察药物作用下细胞增殖和迁移能 力。建立H/R诱导的细胞氧化应激凋亡模型,流式细胞学检测细胞凋亡率, DCFHDA荧光探针检测胞内ROS的变化,Fura-3AM荧光探针检测细胞内钙离子 变化,免疫荧光染色和Western Blot检测XO、caspase3等蛋白分子的表达情况, 利用通路阻断剂和干扰RNA技术,阐明Liraglutide通过激活P13K/Akt—Survivin分 子信号在抗细胞氧化应激过程中的保护作用机制。 万方数据 解放军医学院硕士学位论文结果: 解放军医学院硕士学位论文 结果: 1.体外分离SD乳鼠原代CMEC,72 h后细胞呈典型“铺路石样”生长,CD31 及Ⅷ因子免疫荧光染色提示双阳性率大于95%,说明CMEC纯度较高。 2.CD3l和GLP.1R抗体免疫荧光共定位染色提示CMEC表达GLP.1受体, MTT示Liraglutide以浓度依赖方式促进CMEC的体外增殖。100 nM为其最适生 长浓度。 3.予以Liraglutide预处理细胞24 h,BrdU和划痕实验均说明Liraglutide能以 浓度依赖性促进CMEC的增殖和迁移能力。 4.通过缺氧4

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