磷酸二酯酶7A在肝细胞肝癌中作用机制的研究-外科学（普外）专业论文.docx

浙江大学博士学位论文致谢 浙江大学博士学位论文 致谢 时光荏苒、岁月如梭，转眼间校园生活即将走到尽头。回首过去，思绪万千。 二十多年的寒窗苦读，有过成功的喜悦，亦有过失败的沮丧，有太多的人和事值 得记忆； 十多年的梦想，今日一朝得圆，美丽的西子湖畔，感受新杭州，感谢浙江大 学，体验名师零距离；感谢浙江大学，昔日的陌生人，今朝的相识又相知；感谢 浙江大学，求是、创新，鼓舞我心，展望未来，再创辉煌； 感谢郑树森院士国际化的视野，前沿而精髓的学术造诣，严谨勤奋的治学风 格，从容、乐观、豁达、以身立行的做人风格，不仅使我明白了如何看待事物， 懂得了如何规划自己的人生，而且还明白了许多待人接物与为人处世的道理，深 刻影响着我今后的工作和生活； 衷心感谢我的恩师王伟林教授对我的淳淳教诲和悉心关怀。在我的学习过程 中，从论文选题、试验设计及实施，到论文的撰写与修改，每一个环节中无不凝 聚着恩师的汗水和心血。王伟林教授是一位良师益友，他严谨的治学态度、渊博 的知识、创新的思维和高尚的人格给我留下了深刻的印象，并将使我受益终身； 感谢实验室周琳老师、谢海洋等老师对我实验的指导与帮助，在实验以及论文撰 写方面对我的无私帮助； 感谢所有师兄弟，科研、生活终目相伴、无微关心； 感谢我的父母一直以来对我的理解、支持、鼓励。 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 磷酸二酯酶7A在肝细胞肝癌中 作用机制的研究 浙江大学医学院 外科学(普外) 博士研究生 谢敏杰 导 师 王伟林教授 中文摘要 根据美国癌症协会的最新数据显示，无论是发达国家还是发展中国家，肿瘤 已然成为一个世界性的健康问题。而且即使是在世界范围内，肝癌的发病率仍然 在所有肿瘤疾病中名列前十。中国作为一个乙肝大国，有着较高的肝癌发病风险。 据美国癌症协会统计，截至2015年，肝癌在我国所有肿瘤相关疾病中的发病率名 列前五，且在男性患者中排名第三。而作为恶性程度较高的肝癌，往往发现较迟， 且限于各种原因，患者不能得到较好较及时的手术治疗。由此，发现更多肝癌治 疗手段的任务迫在眉睫。磷酸二酯酶(PDEs)是一组有着11个基因亚型，能够特 异性水解环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)，从而影响cAMP和cGMP 所参与介导的cAMP／PKA通路和cGMP／PKC通路，最终调控有关激素以及信号通 路的基因家族。已有的研究结果表明，PDE7A在肝脏细胞中有明显表达，且能够 相对特异性的参与水解cAIglP，通过改变cAMP在细胞内的水平，进一步间接的 调控细胞的增殖、生长、凋亡等生物学行为。这也就意味着在肝细胞肝癌中对 PDE7A的深入研究在肝癌的诊疗进展上有着明显的促进作用。 第一部分磷酸二酯酶7A(PDE7A)具有促进肝癌细胞增殖和迁 移的能力 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 目的： 磷酸二酯酶7A(PDE7A)是磷酸二酯酶家族(PDEs)中的一员，它在肝脏、 头颅等组织器官中均有着一定量的表达与分布。和大部分的PDEs成员一样， PDE7A能够特异性的水解cAMP，从而影响cAMP所参与调节的下游通路的表达。 异常的细胞周期，无限的增殖，以及突出的迁移侵袭能力是肿瘤所共有的突出特 点，根据已有的研究结果显示，PDE7A很有可能表现出类似肿瘤基因的作用，并 且在恶性肿瘤的过度增殖、侵袭转移等各方面发挥出不同的作用。本实验希望能 够进一步明确PDE7A在肝癌细胞中对增殖、迁移等方面的具体影响。 方法： 首先通过浙江大学医学院附属第一医院肝癌患者的标本资料库提取90名肝癌 患者的癌组织和癌旁组织，对其进行免疫组化检测PDE7A的含量；对90名患者 的术后生存期做长达五年的随访并做PDE7A相关的生存曲线分析。利用Western blotting技术对目前常用的肝癌细胞系，如HepG2、SK．Hep。1、HCC—LM3、 SMMC．7721和Huh．7等检测PDE7A的表达量水平，确定实验用细胞系。通过小 干扰RNA(siRNA)技术抑制PDE7A在肝癌细胞中的表达量水平，构建PDE7A 正常表达组和PDE7A低表达组模型。利用流式细胞术分别检测PDE7A正常表达 组和PDE7A低表达组中细胞周期分布的变化；利用Westernblotting技术分别检测 PDE7A正常表达组和PDE7A低表达组中有关的细胞周期调控蛋白的表达量水平。 通过划痕实验以及Transwell实验比较PDE7A正常表达组和PDE7A低表达组中细 胞侵袭迁移能力的差异。EdU技术以及CCK8技术检测比较PDE7A正常表达组和 PDE7A低表达组细胞增殖能力的差异。 结果： ⅡI 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 在我们所统计的