沙利度胺对人胶质瘤细胞U251的体外作用及其机制的研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则， 承担相应的法律责任。 研究生签名：塞元临导师签名：磐、学院领导签名： 圳g年弓月z．7日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生虢塞译聊弛 劲以年3月z7日 中文摘要沙利度胺对人胶质瘤细胞 中文摘要 沙利度胺对人胶质瘤细胞 U251的体外作用及其机制的研究 摘 要 目的：通过体外实验观察沙利度胺对人神经胶质瘤细胞 U251增殖及对缺氧诱导因子HIF-1、血管内皮生长因子 VEGF和对钙离子Ca2+浓度的影响，进一步阐明沙利度胺抗 肿瘤、抗血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制，同时观 察沙利度胺联合顺铂对U251细胞的作用。 方法：1、选取人神经胶质瘤U251细胞系进行体外培养， 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测沙利度胺不同浓度组(10、 25、50、1001xg／m1)、不同时间组(24、48、72h)对U25l细胞 存活和生长的影响情况。流式细胞仪测定沙利度胺对U251 细胞周期分布和凋亡的影响。2、根据MTT的结果，设置对 照及实验组，分别提取各组细胞总RNA，鉴定其完整性及含 量，通过逆转录一聚合酶链反应(revers transcription PCR， RT-PCR)半定量检测沙利度胺处理前后U25 1细胞中HIF一1 和VEGFmRNA的表达水平。采用流式细胞术(flow c矿ometw，FCM)定量检测沙利度胺处理前后U251细胞周期 分布和凋亡及对HIF一1和VEGF蛋白表达的影响。3、采用 MTT比色法检测沙利度胺与抗癌药物顺铂联合应用后对 U25l细胞的增殖抑制作用，测定其吸光度(OD)值，并采 用isobolanalysis公式分析相互作用指数(Iteraction Index)， 评价两药联合后的作用，如相互作用指数1为两药拮抗作 用；相互作用指数=1为两药相加作用；相互作用指数l为 中文摘要两药协同作用。4、利用激光共聚焦显微镜观察沙利度胺不 中文摘要 两药协同作用。4、利用激光共聚焦显微镜观察沙利度胺不 同浓度组(10、25、50、100斗g／m1)作用72h后U25l细胞中 Caz+荧光强度的变化。 结果：1、MTT结果显示：沙利度胺在(10～100)“∥ml 浓度范围内能明显抑镱tlU25 l细胞体外增殖，随着时间、浓 度增加抑制率相应升高，以100Irtg／ml组作用72h抑制率最高。 与对照组相比，不同浓度组对U251细胞抑制率差异均具有 显著性统计学意义(P0．01)。沙利度胺处理细胞48、72h，IC50 分别为51．62}tg／ml、35．7699／ml。流式细胞仪检Nu25l细胞 周期分布和凋亡显示，10、25、50、1001．tg／ml沙利度胺作用 U251细胞72h，随药物浓度增大，Go／G1期细胞逐渐增多；S 期、G2／M期细胞则逐渐减少。即沙利度胺可阻滞U251细胞 周期进程于Gl期，该作用呈剂量一效应依赖关系。10、25、 50、100}tg／ml沙利度胺处理细胞72h后，出现典型的亚二倍体 凋亡峰，依沙利度胺浓度增大而逐渐升高；凋亡百分率分别 为：9．3 1％、14．53％、1 9．36％、28．30％，较对照组有显著性 统计学意义(PO．01)。2、半定量RT-PCR检测结果显示：沙 利度胺不同浓度组处理U25 1细胞72h后，HIF-1和VEGF mRNA都有不同程度的降低。100“g／ml沙利度胺浓度组作用 72h对U25 1细胞HIF—I矛IIVEGF mRNA表达抑制最显著，比 较沙利度胺处理前HIF一1和VEGFmRNA表达水平差异具有 显著性统计学意义俨O．01)。流式细胞术检测结果显示：0、 10、25、50、100}tg／ml沙利度胺处理U25l细胞72h后U251细 胞中HIF-1蛋白表达荧光指数(FI值)分别为1．719、1．645、 1．329、1．202、1．08 1，VEGF蛋白表达荧光指数(FI值)分别为 2．248、1．976、1．553、1．337、1．097。比较处理组和对照组的 中文摘要FI值，差异具有统计学意义(PO．05