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链状亚历山大藻生长衰亡相关基因的筛选及分析
学位论文完成日期: 2Q!!生三且 指导教师签字:
答辩委员厶成员签字.螫建塾
独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的
独创声明
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得或其他教育机构的学位或证 书使用过的材料。与我~同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。
学位论文作者签名:竹谁 签字日期:为“年s月≥1 El
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。
学位论文作者签名: 付维 导师签字:n匕、∥
签字日期:2口11年岁月易}日 签字日期:砷}1年j月吾1日
学位论文作者毕业后去向:
工作单位: 电话:
通讯地址: 邮编:
究就更少了。本文采用抑制性消减杂交(Suppression
究就更少了。本文采用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization, SSH)技术构建了衰亡期的链状亚历山大藻(Alexandrium catenella)特异表达 的eDNA文库。共获得单克隆800个,利用巢式引物进行PCR筛选,最终确 定有556个阳性克隆。利用斑点杂交技术对这些阳性克隆进行差异筛选,获得 160个差异表达克隆。测序后得到片段125个,经过归类,获得21种序列, 其中6种在NCBI中经Blast,能够与已知基因匹配,这些基因分别是CHKl类 似检测点蛋白(checkpoint.1ike protein)、核酸外切酶复合体、谷氧还蛋白、Na+/ K+ATPase、叶绿体中的一个开放阅读框和pGl蛋白,其他blast无同源序列, 可能为新基因。推测链状亚历山大藻的衰亡过程涉及到一些DNA损伤、 mRNA降解过程、氧化还原状态的变化、离子动态平衡的变化以及叶绿 体一些生理状况的变化等过程。我们用荧光定量PCR技术对这6个片段 当中出现频率最高的pGl蛋白进行了研究,研究结果表明,在无N、无P 和正常培养条件下衰亡期的藻中,该基因的表达量均高于在其他时期的表 达,证明该基因是链状亚历山大藻衰亡相关的基因。 关键词:赤潮;链状亚历山大藻;衰亡;抑制性消减杂交
(二)从有毒赤潮藻种链状亚历山大藻中成功克隆actin基因的部分序列,经测
(二)
从有毒赤潮藻种链状亚历山大藻中成功克隆actin基因的部分序列,经测 序该片段长度为110bp。为了研究保守基因的进化地位,对本次克隆得到
的actin基因片段和本实验室以前克隆得到的cob基因片段进行了同源序
列比对,并以它们为基础分别构建了系统进化树。结果显示以这两种基因 构建的系统进化树是不同的,揭示这两种基因的系统进化地位可能存在差 异。用actin构建的系统进化树与物种的分类地位基本一致,而用cob构 建的系统进化树则与物种分类地位存在差异。 关键词:链状亚历山大藻;actin cD6;进化
Screening
Screening and analysis of growth decline related gen es from Alexandrium catenella(Dinofagellate) Abstract(I)
With the woldwide industrialization,red tide events were reported more frequently and their harm to people had become more and more severe.Though,
great efforts had been made to elucidate the ecology and biology of red tide,the
studies of the molecular biological mechanism o
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