高中生物选修一1.2-基因工程的基本操作程序.pptVIP

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： DNA分子杂交技术过程详解—— 从转基因生物中取出含有目的基因片段的双链DNA，然后加热使之变性成两条单链。 再用DNA探针与这两条单链分别杂交（即复性，产生双链）。 所谓的探针就是含有目的基因的同位素标记过的DNA片段。 当目的基因成功导入我们要测的基因上时，探针就可以与之进行碱基配对。当目的基因未成功导入时，探针便无法与之正确配对形成双链产物。 这样，通过检测新合成双链产物的放射性就可以判断导入是否成功了。 Western杂交（抗原—抗体杂交） 具体做法是： 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）； 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— 感受态细胞吸收DNA分子 (三)将目的基因导入受体细胞 * * 1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ③过程： ④优点:经济和有效 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵培养 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 细胞类型 常用方法 受体细胞 转化过程 植物细胞 农杆菌转化法 体细胞 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA 动物细胞 显微注射技术 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵→受精卵→显微注射→早期胚胎培养→胚胎移植→发育成为具有新性状的动物 微生物细胞 Ca2+处理法 原核细胞 用Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 将目的基因导入受体的方法 * * （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 归纳步骤 （二）、鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 目的基因的检测与鉴定 检测步骤 目的 方法 原理 工具 现象 1 DNA分子杂交技术 碱基互补配对 放射性同位素作标记的含目的基因的DNA片段 杂交带 2 检测目的基因是否转录出了mRNA DNA分子杂交技术 碱基互补配对 放射性同位素作标记的含目的基因的DNA片段 杂交带 3 检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交 抗体的专一性 特定抗体 杂交带(阳性反应) 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 * * * * * * * * 1.2 基因工程的基本操作程序 * * 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 操作过程 目的基