离子液体中胶红酵母苯丙氨酸解氨酶催化性质研究-生物工程专业论文.docxVIP

Classified Classified Index：Q墨!墨 Secrecy Rate：Pubizied UDC：579 University Code：1 0082 Hebei University of Science and Technology Dissertation for the Master Degree The Catalytic Characteristics of Phenylalanine Ammonialyase from Rhodotorula mucilaginosa in Systems Containing Ionic Liquids Candidate： Han Cong Supervisor： Prof．Cui Jiandong Enterprise Supervisor： Sn Engr．Zheng Yuechuan Academic Degree Apppfied for： Master of Engineering Speciality： Biological Engineering Employer： College of Biological Science an Engineering Date of oral Examination： Mau 201 5 万方数据 河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 河北科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发 表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 伽丛 锥篷承 训忤蜩，乡日 乙心年年月I弓日 ；．-I：tL科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 口保密，在』解密后适用本授权书。 本学位论文属于 酥保密。 (请在以上方框内打“4”) 学位论文作者签名：锄丛 燃导 狲二y 稚签 。J一¨f 莲 动J年跏月，；Et 撕∥， 阵≮午 1夕房阵蛔 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 离子液体(Ionic Liquids，IL)，是在室温或室温附近(100℃)由有机阳离子和有机 或无机阴离子构成并且呈液态的盐类化合物。离子液体具有诸多优点，因此受到极 大的关注，被开发和应用到诸多领域，尤其是在生物催化方面被广泛关注，目前已 经被应用于木瓜蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、p一葡萄糖苷酶等酶催化反应中，但在 苯丙氨酸解氨酶(PAL)催化应用方面尚未见报道。本文通过研究不同离子液体对PAL 催化活性的影响，筛选出能显著提高PAL活性的离子液体，并进一步研究了PAL在 该离子液体中各种催化性能。 1) 胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)PAL的部分纯化 通过玻璃珠对胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)进行破壁，提取粗酶液，并在 冰浴中利用40％饱和度的硫酸铵进行蛋白沉淀，采用透析法除去硫酸铵，进而通过 PEG20 000对酶液进行浓缩，并通过Sepharose 4B凝胶柱、DEAE．Sepharose FF离子 交换柱进行了部分纯化。结果表明：PAL纯化倍数为22．7l，酶活回收率为35．5％。 对部分纯化后的酶液进行SDS—PAGE凝胶电泳得到三个条带，表明得到部分纯化的 PAL。 2) 离子液体的筛选 研究了不同浓度的1．乙基一3．甲基咪唑四氟硼酸盐([EMIM]BF4)、1．丙基．3．甲基咪 唑四氟硼酸盐([PMIM]BF4)、l一丁基一3一甲基咪唑四氟硼酸盐([BMIM]BF4)、l一丁基．3一 甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM]PF6)、1．戊基．3．甲基咪唑四氟硼酸盐([PtMIM]BF4)、1一 戊基一3一甲基咪唑六氟磷酸盐([PtMIM]PF6)、1一已基．3一甲基咪唑四氟硼酸盐 ([HMIM]BF4)、1一己基。3．甲基咪唑六氟磷酸盐([HMIM]PF6)8种离子对苯丙氨酸解氨 酶(PAL)催化L一苯丙氨酸(L．phe)生成反式肉桂酸的影响，结果表明，与单一的缓冲液 反应体系相比，发现在反应体系中加入55％的疏水性离子液体[HMIM]PF6，酶活性 提高了33．5％。 3)离子液体[HMIM]PF6对PAL活性和稳