灵芝孢子油对两种帕金森病动物模型的神经保护作用及药理机制的实验研究-神经病学专业论文.docxVIP

灵芝孢子油对西种帕金森病动物模型的神经保护作用及药理机制的实验研究 灵芝孢子油对西种帕金森病动物模型的神经保护作用及药理机制的实验研究 中山大学博{一学位论文 灵芝孢子油对两种帕金森病动物模型的神经 保护作用及药理机制的实验研究 博士研究生 朱蔚文 专 业 神经病学 导 师 刘焯霖教授 中山大学附属第一医院神经内科 摘要 研究背景 帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病。 PD的主要病理改变是中脑黑质致密部(SNpc)多巴胺能神经元选择性变性、丢 失，导致纹状体DA匮乏，患者随意运动功能障碍，生活质量严重下降。在60 岁以上的人群中PD患病率约为1％，随着人类平均寿命的延长和社会老龄化加 重，PD的患病率将逐渐增高，给社会和家庭造成沉重的负担和巨大压力。目前 治疗PD的主要手段仍为多巴胺(dopamine，DA)替代疗法，但给予外源性DA 虽然能有效地减轻患者临床症状，却不能延缓PD病程的进展，随着病情加重，左 旋多巴(L--dopa)的疗效逐渐减退，副作用逐渐增多，患者最终因症状无法缓 解而导致活动困难、生活不能自理。因此寻找有效的预防和治疗PD的药物和措 施是十分迫切的任务。 近年来，针对帕金森病国内外研制了不少新药，如多巴胺受体激动剂、单胺 氧化酶B抑制剂、儿茶酚．氧位一甲基转移酶抑制剂、A2A受体拮抗剂、辅酶Q10 等，但这些辅助性的药物治疗往往只能减轻L--dopa的副作用或改善PD某一类 症状，能否有效地预防和治疗PD尚未有定论。中医药学是我国劳动人民数千年 来通过无数实践经验积累的防病、治病的巨大宝库，利用现代科技手段从中发掘、 炙芝孢子浊对两种帕金森病动物模型的神经保护作用及药理机卷g的实验研究 炙芝孢子浊对两种帕金森病动物模型的神经保护作用及药理机卷g的实验研究 中山大学博士学位论文 筛选有预防、治疗PD作用的新药，并进一步深入研究其活性成分和治疗机理是 目前研究的热点。近年来我国的科学家在研究中药单药治疗PD的可行性上进行 了探索，已发现雷公藤氯内酯醇、人参皂苷R91等具有减轻PD动物模型病理损 伤的中药。灵芝孢子具有多种生物活性物质，有广泛的药理作用，特别在调节机 体免疫功能、抑制免疫损伤、抗凋亡、抗氧化等方面，具有广阔的研究与开发应 用前景。本实验小组已发现使用灵芝孢子粉预处理6-OHDA大鼠模型，能减少 出现旋转行为的模型动物比例，并减少手术侧黑质神经元的死亡。另外有研究发 现灵芝孢子可以促进受损伤的脊髓运动神经元存活及其轴突再生。因此值得深入 研究灵芝孢子治疗PD的可行性和作用机理，为进一步开发、应用灵芝孢子的有 效成分提供线索和依据。 研究目的 1．探讨灵芝孢子中治疗PD动物模型的有效成分，比较灵芝孢子水溶性成分 和油性成分的作用效价及量效关系。 2．研究灵芝孢子油对6一OHDA大鼠PD模型和MPTP小鼠PD模型的行为 学、纹状体DA含量、黑质病理改变的影响，探讨灵芝孢子油治疗PD的可行性。 3．探讨灵芝孢子油治疗6．OHDA大鼠PD模型和MPTP小鼠PD模型的药 理机制。 方法和结果 第一部分灵芝孢子粉、灵芝孢予粉水溶性成分、灵芝孢子油对 6-OIIDA大鼠模型行为学、病理变化影响的比较 方法 1．动物分组及处理： 随机将SD大鼠分为灵芝孢子粉+6一OHDA组、灵芝孢子粉水溶性成分 +6一OHDA组、灵芝孢子油+6．OHDA组、6-OHDA组、假手术组：前3组分别 JI 灵芝孢于油对两种帕金森病动物模型的神绎保护作用及药理机制的实验研究 灵芝孢于油对两种帕金森病动物模型的神绎保护作用及药理机制的实验研究 中山大学博上学位论文 给予30％灵芝孢子粉溶液、灵芝孢子粉水提物、c02超临界摹取的灵芝孢子油． 后两组给予蒸馏水灌胃10天。期间在第4天行脑立体定向手术。 2．6．-OIqlDA大鼠帕金森病模型的建立 在第4天将各组大鼠固定在大鼠脑立体定位仪上，以前囟为坐标原点，前囱 右旁开1．6mm，前囟后4．9mm，脑面下7．9mm为右侧黑质致密部定位点，钻开颅 骨后，用微量注射器注入相应溶液：假手术组注入3 u l O．2％抗坏血酸生理盐水， 其余各实验组注入3 u l(18 p g)6-OHDA／抗坏血酸生理盐水。 3．造模后动物行为学变化的观察 每周腹腔注射阿朴吗啡，诱发模型动物出现向手术对侧的旋转运动。 4．免疫组织化学法检测SNpell：l阳性细胞形态和数量 结果 1．不同处理组在术后各周经阿朴吗啡诱发出现旋转运动的情况： 在造模四周后各组大鼠被诱发出现)7转／min的旋转行为的鼠只比例分别 是：6-OHDA组50％，灵芝孢子粉组25％，灵芝孢子水溶性成分组40％，灵芝 孢子油组25％。灵芝孢子粉组与灵芝孢子油组比较无差异，它们分别与6