实验5 除草剂与杀菌剂毒力测定.pptVIP

杀菌剂与除草剂的毒力测定 吴顺凡 农药科学系 杀虫剂毒理与害虫抗药性监测课题组 邮箱：wusf@njau.edu.cn；办公室：理科楼B828 2014-5-16 实验五 利用有害生物（靶标生物，如昆虫、螨类、病菌、线虫、杂草等）对作用物的反应评价化合物生物活性的基本方法 ---陈年春“农药生测技术” 农药生测现在已发展成为是集昆虫学、植物病理学、微生物学、植物学、杂草学、化学、生物技术、统计学等多学科于一体的综合技术，是农药科技创新工程中不可或缺的关键技术。 农药生测技术内涵 生理活性 物质 靶标生物 虫、草、菌等 反应程度 生物测定已成为研究 作用物、靶标生物 和反应强度三者关系 的一项专门技术 杀菌剂的毒力测定 杀菌剂生物测定流程 药剂毒力测定； 定性定量分析； 防治效果测定； 杀菌剂室内生物测定主要方法 孢子萌芽测定法：观察供试病菌孢子是否萌发，来判定杀菌剂毒力大小； 生长速率法：将不同浓度的药液与溶化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以其生长速度快慢判定药剂毒力大小。 将不同浓度的药液和热的培养基混合，用这种含药培养基培养病原菌，以病原菌的生长进度的快慢来判定药剂毒力的大小。 生长速率法原理 菌饼（菌碟） 含药培养基 生长速率法示意图 注意事项： 应先加药液再加 培养基（1:9）； 对一些受热易 分解的药剂则要 待培养基冷却到 50度左右时再加入。 优点： ① 操作比较简单；　 ② 适用范围广，适用于乳油、水剂、可湿性粉剂等； ③ 重复性好，只要操作认真，均可得到可靠的结果。 生长速率法的优缺点 缺点： ① 对供试菌种要求较严格，病菌要易于培养，生长较快且边缘整齐、产孢子缓慢，而且是农业生产上重要的病原菌； ② 对供试药剂要求，有一定的耐热性，遇热不易分解。 多菌灵（carbendazim）对小麦赤霉病菌的毒力测定 供试菌株： 小麦赤霉病菌（Fusarium graminerarum）敏感菌株2021和抗性菌株JT04。 2021 JT04 试验目的：掌握生长速率法测定杀菌剂毒力。 供试药剂： 98%多菌灵原药，由江苏龙灯化学有限公司提供。多菌灵用0.1M HCl分别配成10000μg/mL、100μg/mL母液。 剂量设置： 1. 测定敏感菌株2021，取一定量的100μg/mL母液多菌灵母液，加入到50mL PSA中，每个处理3个重复。 2. 测定多菌灵抗性菌株JT04： 药剂浓度为： 0（对照）、1.25、2.5、 5、 10、 20、40μg/mL，取400 μL 10000μg/mL母液，加入到100mL PSA中，即得40μg/mL，然后梯度稀释，每个处理3个重复。 药剂浓度 (μg/mL) 0 (CK) 0.2 0.4 0.6 0.8 1 母液体积 (μL) 0 100 200 300 400 500 （1）制备含药培养基：准确取一定量的药液加入到热的培养基中，混匀，倒入灭菌的培养皿中，待冷凝后即为含药培养基； （2）制备菌饼：用无菌的打孔器在供试菌种边缘打下菌块即菌饼（在无菌条件下进行）； （3）移植菌饼：用接种针将菌饼（有菌丝的一面向上）移植到含药培养基平板的中央，一个培养皿接一个菌饼； （4）测定菌落直径：25℃培养3天，取出培养皿测量菌落直径。每个菌落十字交叉测两次直径，取平均值。 操作步骤 数据处理 将抑制率换算成机率值，作为Y；将药剂的剂量数值换算成对数值，作为X，直线回归，求出毒力回归方程Y＝a+bx，计算EC50。 抑制率 = 对照菌落直径 – 处理菌落直径 对照菌落直径 – 菌饼直径 ×100% 注：菌饼直径为5mm 抑制率 机率值 80.1 5.8452 55.9 5.1484 53.7 5.0929 38.7 4.7129 30.1 4.4785 19.4 4.1367 剂量 剂量对数 2.6 2.3 2 50 1.7 25 1.4 12.5 1.1 实验报告要求 药剂浓度(μg/ml) 菌落直径（mm) I II III 平均 抑制率（%） 毒力回归方程 相关性 EC50(μg/ml) 多菌灵对小麦赤霉病菌2021/JT04菌丝生长的抑制效果 除草剂的毒力测定 几个概念 抑制中浓度：指抑制50%