临床分离铜绿假单胞菌多重耐药株外排泵机制的研究-内科学专业论文.docxVIP

摘要目的：研究铜绿假单胞菌临床分离耐药株中的多重药物外排泵 摘要 目的：研究铜绿假单胞菌临床分离耐药株中的多重药物外排泵 (以MexA—MexB—OprM为例)的耐药机制。探讨在临床中分离的多重 耐药铜绿假单胞菌菌株是否存在MexA—MexB-OprM外排泵表达的增强 及其调节基因mexR的突变。 方法：收集来自临床送检标本的铜绿假单胞菌多重耐药株13株 和对常用抗菌药物敏感菌5株。质控菌株ATCC27853。进行常规分离 再鉴定。采用K—B纸片法检测上述细菌对16种抗菌药物的药敏情况。 分别采用标准纸片扩散法和头孢西丁三维试验检测ESBLs和AmpC酶。 提取细菌的外膜蛋白进行SDS—PAGE分析，比较外膜蛋白OprM表达的 差异。并进一步提取多重耐药菌株的染色体DNA，PCR反应扩增 MexA—MexB—or—rM外排泵的调节基因mexR，对产物进行测序，分析突 变情况。 结果：1．所收集的13株临床多重耐药株的耐药表型与多重药物 外排泵MexA-MexB—OprM表达增强菌株的耐药表型基本一致。所收集 的5株临床敏感菌对所测抗生素全部敏感。2．所收集的13株临床多 重耐药株均未检测到ESBLs和AmpC酶。3．铜绿假单胞菌的外膜蛋白 SDS—PAGE分析显示多重耐药菌株较完全敏感菌株和质控菌株在 49kDa处的条带表达明显增强。4．13株多重耐药菌株的mexR基因序 列分析结果显示存在编码基因的点突变，共存在4个位置的碱基置 换，其中两个引起编码氨基酸的改变。 结论：1．13株临床分离铜绿假单胞菌多重耐药株存在 MexA-MexB—OprId的外膜蛋白成分OprM的表达增强，提示有该外排泵 耐药机制的存在。2．13株多重耐药菌的mexR基因存在点突变，提 示mexR基因突变引起MexA—MexB—OprM外排泵表达增强。 关键词铜绿假单胞菌，多重耐药，外排泵，mexR基因 ABSTRACTobjectives：To ABSTRACT objectives：To explore the resistance mechanism of multi．drug efflux pump(take MexA-MexB—OprM for example)in Pseudomonas aeruginosa clinical isolates；to investigate whether there are changes in MexA—MexB—OprM expression levels；to carry mutation analysis of mexR，the regulation gene ofMexA—MexB-OprM． Methods：To isolate and identify 1 3 multidrug Pseudomonas aeruginosa isolates and 5 antibiotic susceptible isolates from clinical specimens．The susceptibilhy of 1 6 antimicrobial agents was tested by the disk diffusion method．ESBLs were tested by piece type confirm test and AmpC enzyme was examined by cefoxitin three．dimensional test．Outer membrane proteins of multidrug Pseudomonas aemginosa isolates were extracted and then analysed by SDS．PAGE．Chromosome DNA of 1 3 multidrug clinical isolates was extracted and mexR mutations were analyzed with nucleotide sequencing． Results：1．The antibiotic resistant phenotypes of 1 3 multidrug Pseudomonas aeruginosa isolates were identical with the antibiotic resistant phenotypes of Pseudomonas aeruginosa isolates which overexpressed MexA-MexB-OprM efflux pumps．5 susceptible isolates were susceptible to 1 5 antib