两轮荧光原位杂交技术在种植前遗传学诊断中的应用-妇产科学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 1 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 PGD PGS HLA FISH PCR IVF ICSI CGH ADO CEP LSI Tel HCG PBS COH preimplamation genetic diagnosis preimplamation genetic screen human leukocyte antigen fluorescence in situ hybridization polymerase chain reaction in vitro fertilization intracytoplasmic sperm injection compartive genomic hybridization allele dropout chromosome enumeration probe locus specific identifier probe telomere probe human chorionic gonadotropin phosphate buffered saline controlled ovarian hyperstimulation 植入前遗传学诊断 植入前遗传学筛查 人类白细胞抗原 荧光原位杂交 聚合酶链反应 体外受精 卵母细胞浆单精子注 比较基因组杂交 等位基因脱扣 着丝粒探针 位点特异探针 端粒探针 人绒毛膜促性腺激素 磷酸盐缓冲液 控制性超促排卵 两轮荧光原位杂交技术在 种植前遗传学诊断中的应用 中文摘要 第一部分 两轮荧光原位杂交技术应用的初步研究 目的：在废弃胚胎中应用一快速、简便的单细胞核固定和两轮 FISH 检测技术， 探究其可行性，同时分析植入前胚胎中非整倍体和嵌合体的发生情况。方法：收 集本中心行 IVF 或 ICSI 不适合移植的第 3 天废弃胚胎 24 枚，每枚胚胎的卵裂球 数目不少于 4，在显微操作采用激光打孔法在胚胎透明带上打出合适的孔，然后用 活检针对胚胎进行活检，使培养皿液滴中出现单个分散卵裂球。每个胚胎活检 2～ 3 个卵裂球转移至防脱载玻片上，采用 HCL/Tween20 方法进行核固定，核固定后， 应用两轮 FISH 方法对 8 种关键染色体：13，15，16，18，21，22，X 和 Y 进行分 析，计算杂交成功率并分析非整倍体和嵌合体的发生情况。结果：两轮 FISH 均能 见到较清晰的杂交信号；24 枚胚胎共活检 72 个卵裂球，固定到 69 个核，核的固 定成功率为 95.8%，69 个核中 65 个核信号诊断明确，其 FISH 杂交成功率为 94.2%； 24 枚胚胎中，正常胚胎 6 枚，异常胚胎 18 枚，18 枚异常胚胎中，多倍体胚胎 2 枚，单倍体胚胎 1 枚，非整倍体胚胎 8 枚，嵌合体胚胎 7 枚。结论：两轮荧光原 位杂交方法在植入前第 3 天的废弃胚胎中成功地被应用，具有简单、快速、准确 等特点。 第二部分 两轮FISH技术在植入前胚胎遗传学诊断中的应用 目的：探究此两轮 FISH 技术、卵裂球活检以及核固定方法应用于临床 16 个 PGD 周期的可行性。方法：采用本中心常规控制性超排卵方案排卵，取卵后行卵母细 胞浆单精子注射，受精第 3 天对胚胎发育情况进行观察，选择正常受精来源、胚 胎卵裂球数目在 6 细胞以上，胚胎碎片 20%以内的胚胎行卵裂球活检。采用 HCL/Tween20 方法进行核固定。根据患者染色体情况选择相应探针进行荧光原位 杂交，活检后的胚胎转入囊胚期胚胎培养液（Cook，USA）中继续培养。最后根据 FISH 结果和第 5 天胚胎发育情况选择合适的胚胎移植。结果：16 个周期共对染色 体组成正常或平衡的 27 个胚胎进行宫腔内移植，共获得 4 例妊娠，妊娠成功率为 25%。1 例 14 天测尿 HCG（+），现正在等待 35 天 B 超结果；另 3 例除 1 例为异 位妊娠外，另 2 例均为正常单胎妊娠：1 例患者尚在妊娠之中，另 1 名患者现已足 月分娩一健康女婴，体重 2800g，该婴儿为安徽省第一位通过“FISH 法”种植前 遗传学诊断技术诞生的染色体易位患者的后代。结论：说明通过此方法帮助具有 高遗传风险夫妇获得健康后代是可行的，同时也说明本中心已具备开展 PGD 的能 力。 关键词：植入前遗传学诊断；植入前遗传学筛查；非整倍体；嵌合体；荧光 原位杂交；胚胎活检 Application of Two rounds of FISH in Preimplantation Genetic Diagnosis Abstract Part Ⅰ Prime study of two rounds of FISH Objective: To search the