第七章 DNA体外重组与基因转移.pptVIP

一、 DNA的体外重组（切与接） 二、重组DNA分子的转化和扩增（转与增） 第八章 重组转化子的筛选和鉴定（检） 某一细菌质粒载体的Tetr基因中含有一个HindⅢ切点，用HindⅢ切割果蝇的基因组DNA，并以该载体构建基因文库，分子杂交证明阳性克隆带有果蝇的目的基因，用HindⅢ和EcoRV对质粒和阳性克隆(克隆15)进行酶切分析，电泳结果如图1，试绘出含有插入片段和不含插入片段的质粒限制性酶切图谱，并标明Tetr的位置。 检测克隆DNA序列的其它方法： 菌落或噬菌斑原位杂交法 DNA序列分析法 蛋白质生物功能测定法 第九章 外源基因的表达 考试题型 一、名词解释（ 3’ × 5 ） 二、判断（1’×10） 三、填空题（ 1’× 10） 四、问答（ 10’× 5） 五、分析和计算（15 ’× 1;10’×1） 酵母双杂交结果 外源基因产物检测 蛋白质生物功能测定法 DNA结合蛋白编码基因的鉴定： 影印 用聚乙烯薄膜影印裂解平板 洗涤 杂交 感光 轻轻漂洗影印薄膜，干燥固定 80℃烘干固定影印薄膜 与探针溶液中杂交 洗涤、干燥、感光 用氯仿蒸汽或烈性噬菌体喷洒克隆平板 聚乙烯膜 探针选用能与 目标蛋白特异 性结合的DNA 片段 外源基因产物检测 蛋白质生物功能测定法 杂交释放转译鉴定： 合并 变性 挂柱 制备 上样 淋洗 洗 脱