重组体克隆的筛选和鉴定.pptVIP

第七章 重组体克隆的筛选和鉴定 第一节 利用遗传标记的表型特征筛选 如：pBR322质粒上有两个抗菌素性基因: Tetr和Ampr。  2. pBR322抗菌素标记选择 3. 选择过程： （2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程 二、营养缺陷型筛选法 如：亮氨酸（Leu)缺陷菌在无Leu培养基中不生长， 当含Leu外源基因在此缺陷菌中表达时可生长，以此来筛选阳性克隆。 第二节 根据重组子的结构特征筛选 二、限制性酶切图谱法 筛选过程 三、PCR扩增检测法 四、 核酸分子杂交检测法 2、菌落噬菌斑原位杂交筛选 Southern blot 筛选结果 4. Northern blotting 第三节 免疫化学检测法 2. 放射性抗体检测法过程 3. Broome-Gilbert双位点检测法 二、免疫沉淀检测法 2. ELISA检测的一般步骤 （2）一抗结合 （3）二抗结合 （4）显色反应 （5）比色 3.ELISA的局限性 四、免疫印迹（western blotting）法 ② 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）： ③蛋白质电泳的分子量标准 ④凝胶中的蛋白质染色： （2）Western blotting Western装置 ② Blotting ③ Blotting过程 ④结果 （1）固定样品 将待测样品加入96孔微量滴定板（microtiter plate）