扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的表征研究及其晶体的培养-生化与分子生物学专业论文.docxVIP

内容摘要内容提要 内容摘要 内容提要 脂肪酶是一类广泛 应用于洗涤剂、医药、 食品和皮革等方面的重要工业用酶，它 怦逾存在丁-动植物各种组纵及许多微生物中。 脂肪酶是最早被研究的酶类之一．人们 对它的研究己有上百年的历史。 我国脂肪酶的研究只有40多年历史，20世纪60年代末才有报道。1967年，中国 科学院微生物研究所筛选到一株解枝假丝酵母(Candtda lipolytica)AS2．1203。20世纪 70年代末我国开始碱性脂肪酶的研究，施巧琴教授干1981年在国内成功筛选了碱性脂 肪酶生产菌(Penicillium expansum)，并且于1984年首次在江苏南通投入生产。进入90 年代，我国科技工作者紧跟国际研究热点，脂肪酶的研究进入快速发展时期，这些都 促进和加快了我国脂肪酶领域的研究工作。 扩展青霉FSl884碱性脂酶是多代筛选后得到的更优良的产酶菌株，本文对该碱性 脂肪酶进行了表征，酶学特性、稳定性及结晶条件的研究，为研究该酶的催化特性及 应H{等方面提供了依据： 该碱性脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是：ATADAAAFPDLHRAAKLS sA，等电点为5,44，用质谱分析得到该酶的肽质纹图谱，在图谱中该酶为双电荷峰， 分子量为261380．0922Da。并且不含糖基。赖氨酸氨基，组氨酸味唑基及二硫键是它的 活性必需基团，而巯基是维持酶的特定结构的重要基团，该结构与碱性脂肪酶活力有 一定戈系。 该酶的最适作用pH为9．4．最适作用温度为36*(2，在pH7～l l与20C以下相对稳 定；二价离子．特别是c扩对该酶活力有促进作用；以橄榄油为底物时的K。为 0．0359／mL，对硝基苯棕榈酸为底物时的K。为60．61 rtg／mL。羧酸钠。单糖。双糖，多 元醇对该碱性腊肪酶都能起到一定的稳定效果，尤其是单糖，对该碱性脂肪酶的熟稳 定性具有显著作用。 用吐温一80使在乳化液配制的SDS凝胶中电泳后的脂肪酶复性，在胶上出现透明 罔，该方法有利于快速检测混台物中是否含有脂肪酶而且能直接判断出所含脂肪酶的 大约分子量。 利用结品试剂盒对该碱性脂酶进行结晶研究，对有结晶析出的结晶条件细化后重 新培养晶体，得到晶形比较规则的晶体。 关键词：扩展青FSl884霉碱性脂肪酶，分离纯化，表征，化学修饰，结晶 堕查塑塞Abstract 堕查塑塞 Abstract Lip∞e is kind ofmost applied enzymes in scour，medicine，food锄d leather．It be excreted by many kinds oforgans ofplant and animals and many microorganism．Lipese is ofthe studied enzymesinpioneers andithasmorethan onehundredyearsuptonOW． n is about 40_,ears in s．tuding ofthe lipase in country．Till to 1960s the first Brticl of the lipase inland Was published．Institute ofmicrobiology ofCAS fitrated and obtained CandidatipolyaeaAS2．1203inl967．Inthe endofl970s．the study ofalkalinelipaseis start．uD．Qiaoqin Shi first abtained Penicillium expansum which excreting alkaline lipase in 1981 then extended to industry in 1984． Many scholars follow the heels ofoulands to study the iipase artd the mudy oflipase had reached to the pop phases inland inl990s．AIl ofthese had boost the development of lipase in courty． Penicitlium expansum FSl884 is excellent fungus ofexcreting alkaline Iipase by filtrated after other．Wc had studied thre characteristic ofthe lipase and廿ied to find the condition for erysilazatio