生物化学简明教程 第二章蛋白质.pptVIP

肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少 一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 * 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 * 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 α－螺旋（α－helix） ? -折叠 ①定义：两条或几条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，相邻肽链主链上的氨基和羰基之间形成有规则的氢键，维持这种片层结构的稳定。 中性脂肪族氨基酸 酸性氨基酸及酰胺 碱性氨基酸 杂环氨基酸 芳香族氨基酸 氨基酸的两性解离  氨基酸等电点的计算 蛋白质两性解离性质和等电点 β－转角（β-turn） 五、 蛋白质的超二级结构和结构域 卵溶菌酶的三级结构中的两个结构域 正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图 蛋白质两性解离性质和等电点 The thermal denaturation  of ribonuclease 5、蛋白质的沉淀 凝胶过滤层析原理 抗体和抗原的结合：高度特异性 三、蛋白质分子中氨基酸序列的测定 镰刀形红细胞 正常红细胞 氨基酸序列的细微变化 正常的血红蛋白Hb和异常的血红蛋白HbS仅在β链的第6个氨基酸有Glu变为了Val，电泳时向正极的移动速度HbS比HbA稍慢。 人类发现的300多种血红蛋白变体，绝大多数只有一个氨基酸差异，因为取代的位置不同，对功能的影响程度有差异，但目前对取代氨基酸影响功能的了解很少。 ?-链N端氨基酸排列顺序 1 2 3 4 5 6 7 8 Hb-A（正常人） Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys… Hb-S（患 者） Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys… 镰刀状细胞血红蛋白的治疗性矫正 体外用氰酸钾处理患者的红细胞，可防止在去氧时形成镰刀状，输氧能力有好转。 pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 Pr COOH NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- Pr COO- NH2 Pr COO- NH3+ 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI）。 变性是一个协同过程：在很窄的变性剂浓度范围，很窄PH或温度。 （2）、引起蛋白质变性的因素有： ①.物理因素 热（60~100℃）、紫外线、X射线、超声波、高压、表面张力，以及剧烈的振荡、研磨、搅拌等； ②.化学因素 化学因素又称为变性剂，包括：酸、碱、有机溶剂（如乙醇、丙酮等）、尿素、盐酸胍、重金属盐、三氯醋酸、苦味酸、磷钨酸以及去污剂等。 （3)、变性表现及变性机理 ①.生物功能丧失； ②.物理性质发生改变； ③.化学性质发生改变； ④.侧链基团暴露 (4)、复性 复性：蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。 如1条肽链、4个二硫键的RNA酶，被8mol/L尿素和巯基乙醇变性，二硫键全部断裂，酶活性和结晶能力全部丧失，若透析除去变性剂，在氧存在