课件：NSFC申请报告韩苏夏.ppt

谢谢大家！ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 若我们能通过分泌表达原理,在表达分子的氨基或氨基端融合一种具有蛋白质转导结构域(PTD)的肽,非肿瘤细胞内的表达分子就会自由进入残存的肿瘤细胞或转移的肿瘤细胞起到持续性追杀肿瘤的目的，这样蛋白质转导结构域(PTD)就增加了Ant-Apoptin或TAT-Apoptin向细胞和细胞核内的转导。上述思想在确保重组病毒安全性的条件下,提高并持续性增强了杀伤肿瘤的蛋白质和肽的表达，在理论上具有诱人的前景，为治疗实体瘤找到了安全,特异和有效的生物治疗方法。重组慢病毒载体是近年来使用的转导效率高的病毒载体,在改造HIV的病毒的复制元件并提高了安全性后,使用泡沫口炎病毒衣壳蛋白作为重组病毒的衣壳,大大提高了转导效率,同时感染分裂和非分裂细胞。蛋白质转导结构域(PTD)是近年来发现的一种非受体依赖和非能量依赖的新转导理论和方法[16,17]。研究最多的是果蝇Antennapedia homeodomain protein(Ant)和HIV的TAT, 它们能够携带核酸,蛋白和肽自由的通过细胞膜和核膜[18,19]。根据这个理论，我们已经成功的表达了 P53的羧基肽-Ant融合肽，其诱导了肿瘤细胞的坏死和凋亡。本课题设计使用改造病毒载体的目的不但是为了提高转导效率, 而且在表达盒中设计了可分泌表达的信号肽-引导肽元件。采用Ant和TAT-Apoptin融合表达技术[20,21,22],目的是促进Apoptin进入肿瘤细胞核并促使已表达的Apoptin无阻碍的进入毗邻的甚至已经转移的肿瘤细胞[23,24]。当重组病毒感染肿瘤细胞后除了能杀死该细胞之外,它分泌的目的蛋白可以杀死毗邻的肿瘤细胞;更重要的是当肿瘤内的非肿瘤细胞,如间质细胞、免疫活性细胞和血管上皮细胞转导了重组病毒后，表达的Ant-Apoptin和TAT-Apoptin不损害这些非肿瘤细胞,它们可以长期存活并持久表达可分泌的目的蛋白,对实体瘤内的残存肿瘤细胞和已经转移的肿瘤细胞,起到长期持续的杀伤作用。这在以前的肿瘤基因治疗研究中是无法完成的。我们期望该课题的研究能够为肿瘤的基因治疗进入临床开辟新道路。 本课题的研究是探寻有效的、安全的和特异的治疗恶性肿瘤的生物学方法。我们选用了鸡贫血病毒的VP3,Apoptin蛋白作为治疗肿瘤的特异分子,使用重组慢病毒技术来增强目的基因在实体瘤内的转导能力,使用信号肽和引导肽序列来实现非肿瘤细胞转导后的长期持续分泌表达.采用Ant-Apoptin和TAT-Apoptin融合表达方式, 保证治疗分子可以进入未转导重组病毒的残余肿瘤细胞和已经转移的肿瘤细胞,并确保治疗分子导入肿瘤细胞核内的靶部位。通过以上设计来实现对肝癌等实体瘤安全有效的特异性治疗。 立 项 依 据 国内外研究现状及发展动态分析 注意事项 层层展开、强调分析综合；着重找出别人研究的不足或缺陷 综述不全面，忽略了重要进展，提出的问题别人已解决 围绕课题的思路进行综述，层次清晰，观点鲜明 逻辑思路不清晰，没有围绕一个中心问题进行综述 研究现状和分析准确客观 论述既要充分又要简练 简单移植或夸大，可行性差 文献类别要全：以国外文献为主，也要引用国内同行知名专家的文献；引文信息要全；文献年代要新：主要是近五年的文献，最好能有申报当年的最新文献。 撰写模式 作者姓名、题目、具体出处(包括期刊名、年份、卷期、页码等)，20～30条；新，精，准！ 注意事项 正文中重要的论点均要有文献标注 引文信息，格式规范统一，与正文相对应 尽可能引用最新的英文文献（近三年占到2/3左右）和顶级期刊文献 常见问题：过于陈旧；参考文献不够全面；格式不统一 立 项 依 据 研 究 目 标 研究目标撰写要点 指研究要达到的目的（最终结果），是对标题进一步的具体化，是研究对象、研究方法、成果和应用的高度概括。 不能够转写成为研究内容中阶段性成果的罗列。 通常使用一、两句话表达清楚。 一般撰写格式 明确……关系，揭示……规律，阐明……原理（机制），建立……方法等。探寻一种治疗肝癌等实体瘤安全的、有效的、特异的生物学方法, 为实体瘤的基因治疗带来新突破 研 究 目 标 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 研 究 内 容 研究内容是指围绕研究目标拟开展的实验研究。内容要适当：确保研究周期内完成；为目标服务：与研究目标相辅相成；要重点阐述：注意与技术路线区别 。 撰写要求 围绕研究目标逐次展开 研究内容层次分明 研究方法恰当，可操作性强，具有可行性 注意事项内容要适当，确保研究周期内完成 内容要适