快速免疫组化法鉴别人体周围神经感觉纤维的实验研究-外科学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 l 英文摘要 3 研究论文快速免疫组化法鉴别人体周围神经感觉纤维的实验研究 前言······························日lJ舌””””一”””“”“”””” ” 一””· ··· “·· ””“···· “b“6 材料与方法 6 结果·········””””””““”“一“”””“一””一”””””一“一．．“”””“·9 附图 ··································································· “一·10 讨论·············· ·····················································””“”14 参考文献 O 019 综述周围神经束的快速鉴别O O 23 致谢··········· ············· ······· ··· ············· ”””·31 个人简历 0 O 32 中文摘要快速免疫组化法鉴别人体周围神经感觉纤维的实 中文摘要 快速免疫组化法鉴别人体周围神经感觉纤维的实 摘 要 目的：周围神经中含有感觉神经纤维和运动神经纤维两种成分，神经 的功能是由这两种神经纤维的比例所决定的。在神经干中神经纤维并不是 单独行走的，它们彼此组合，被神经束膜分隔成相对独立的神经束，对神 经干内神经束分布规律及性质的判断，可以指导临床进行手术方法的选 择。目前区别神经束的各利，方法，因为各自的不足与缺陷难以应用于临床。 自1970年以来，人们相继发现了多种神经元特异性蛋白，在免疫组织化 学等方法的帮助下，人们对神经元的产生及生长过程有了更多的了解。免 疫组织化学技术(immunohistochemistry)，是应用免疫学基本原理一抗原抗 体反应，即抗原与抗体特异性结合的历!理，通过化学反应使标记抗体的显 色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内的抗原(多肽 和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的形f究，又称为免疫细胞化学技 术(immunocytochemistry)。免疫组织化学技术具有特异性强，快速等优点， 但是应用此技术鉴别周围神经的关键是如何确定感觉神经与运动神经特 有的标志物。膜联蛋白(Annexin V)是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白， 分子量约为35KD，它具有抗凝、抗炎、钙离子通道等作用。据目前研究 Annexin V主要分布在周围神经中的感觉神经轴突，在运动神经中尚未有 发现的相关报道。本实验通过免疫组织化学技术证实膜联蛋白V在剧 神经中特性，并应用这种特性鉴别人刷围神经感觉束与运动束，希掣达剑 证实临床应用快速免疫组化法鉴别人周围神经功能束具有可行性目的，从 而构建科学实验与临床应用之间的桥梁。 方法：实验1选正常健康雄性SD大鼠30只，体重250±109，取大 鼠脊神经前根、后根各5mm，暴露并取坐骨神经及其肌支、皮支各5mm， 将上述组织立即做冰冻切片，片厚5um，行SABC免疫组化法，神经组 织冰冻切片经抗原一抗体反应．抗体标记．DAB显色．苏木精复染，脱片、透 明、封片处理后，显微镜下观察颜色。对照组采用替代试验，即用PBS 代替一抗，其余步骤同实验组。 实验2取新鲜废弃断肢前臂尺神经主干，尺神经腕1I亍支(皮支)及j卜 中神经大鱼际肌支各5ITIm，．J?述组织．0：甚lJ做冰冻切片，”厚5um，行S-P 中文摘要免疫组化法，神经组织切片经抗原一抗体反应一抗体标记一DAB显色一苏木精 中文摘要 免疫组化法，神经组织切片经抗原一抗体反应一抗体标记一DAB显色一苏木精 复染，脱片、透明、封片处理后，显微镜下观察颜色。对照组采用替代试 验，即用PBS代替一抗，其余步骤同实验组。 结果：实验l SD大鼠脊神经根中，前根呈阴性反应，后根为阳性反 应，肌支以未染的神经纤维为主，皮支以深染的神经纤维为主，其中坐骨 神经内既有深染的神经纤维也有未染的神经纤维。对照组的神经组织均呈 阴性反应。 实验2正中神经大鱼际肌支以未染的神经纤维为主，尺神经腕背支 以深染的神经纤维为主，尺神经主干内既有深染的神经纤维也有未染的神 经纤维，对照组的神经组织均呈阴性反应。 结论：在远端神经干内，神经的各分支在干内有明确的定位，即有特 定的功能束存在，而在肢体近端，运动神经束和感觉神经束混合存在。在 混合神经中，各类纤维所占的比例亦有差异。如果某一类纤维所占比例较 大，在再生轴索长入远端神经内膜管的过程中，将有更多的机会长入相关 的神经内膜管，因而周围神经断裂损伤后，在进行神经原位缝合或神经移 位、移植修复术时，要求术者了解神经干内的精细结构，特别是神经干内 神经功能束的定位知识，这样才有可能