镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆及表达-动物学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 蜱是一类专性吸血的体外寄生虫，分布广泛，是许多人和动物重要疾病的传播媒介。经蜱传 播的病原体有细菌、病毒、真菌、立克次体、螺旋体以及原虫，不仅给畜牧业造成很大的经济损 失，同时还影响人类健康。目前世界上约有820多种蜱，我国发现的蜱有110多种，镰形扇头蜱 是我国南方的优势蜱种，主要传播牛巴贝斯虫病、马巴贝斯虫病和吉氏巴贝斯虫病。蜱及蜱传播 疾病引起的经济损失十分巨大，到目前为止。免疫防治被认为是最有潜力的防治策略，而寻找敏 感、长效、安全的抗原基因是免疫防治的前提条件。IgG结合蛋白(igG binding protein，IGBP) 是蜱体内的一种重要蛋白质，主要存在于蜱的血淋巴和唾液腺中，可以结合进入蜱血淋巴中的宿 主免疫球蛋白，避免了宿主免疫球蛋白对蜱内部嚣官的损害，有些种类的IGBP具有雄性特异性， 是雄蜱协助雌蜱顺利完成吸血所必不可少的．IGBP是蜱体内一种具有疫苗潜力的功能分子。 本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交eDNA文库中的F_．ST数据为基础， 应用RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IGBP基因的全长序列，该基因全长683bp，编码 178个氨基酸，预测分子量为19．5kDa，经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP—MB基因序列 的同源性高达92％。用RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、各个发育阶段 的表达情况，结果表明，该基因表达没有性别特异性；IGBP基因在唾液腺、壳这两个器官有所 表达，但在肠中却没有表达；在蜱的各个发育阶段均有表达。成功构建了重组表达载体，并转化 到表达菌B1．21中，经IPTG诱导，结果表明IGBP可以在原核表达系统中高效表达，应用GST 融合蛋白纯化系统，可获得纯化的目的蛋白：探讨了ELlSA方法检测重组蛋白结合宿主lgG活 性的试验， 综上所述，本研究首次克隆、表达了镰形扇头蜱IgC结合蛋白基因，分析它的表达特 I寸 点，并对其功能进行了初步研究，为该基因的进一步研究打‘卜．基础。 关键词：镰形扇头蜱；IgG结合蛋白；克隆；表达 AbstractTicks Abstract Ticks obligate haematophagous ectoparasites，they distribute widely and are the significant vectors transmitting a great number of pathogens of human and animals，such arboriruses，rickettsiae，spirochetes and parasitic protozoa．At present．there are about 820 kinds of tick in the world and more than 110 kinds of ticks found in China．Rhipicephalus hnemnphysatoides tick is predominate kind of ticks in south of china，which transmit Babesia boris，B．equi and B．gibsoni and on．The economic loss caused by ticks and tick-borne pathogens is quite great and immunological protection is deemed the most potential measure at present，which makes the searching for the sensitive，long—term effective，safe antigen genes be the base for immunological protection．1eo binding protein is significant kind of protein in ticks mainly existing in haemolymph and salivary which able to bind host leg that entering the haemolymph of ticks，thus avoiding the damage to the their internal organs． Some kinds of IGBPs male specific which is essential for the male helping the female to havc suecessful meal． Firstly，we obt