雷氏大疣蛛毒蛋白分离纯化和生物活性测定-植物学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 蜘蛛毒素是神经毒素的一个新的重要来源，蜘蛛毒液中有特异性生物活性的小分子 是我们寻找无公害杀虫剂和新型药剂的最佳模式分子。本研究对异纺蛛科的雷氏大疣蛛 Macrothele raveni(Zhu etal．，2000)、施氏单柄蛛Haplopelma schmidti(Wirth，1991)、 狒蛛科的海南单柄蛛Haplopelmahainanum(Liang etaI，，1999)、敬钊缨毛蛛Chilobrac机一 ，ingzhao(Zhu et al，2001)四种蜘蛛毒素的抗虫、抗菌、抗肿瘤及对哺乳动物毒性等 生物学性质进行了测定和比较，并从雷氏大疣蛛毒素中分离出单一抗虫组分MR．EIII。 本研究测定并比较了蜘蛛毒素对棉铃虫(Helicoverpa armigera)的胃毒活性和对丈 蜡螟(GallermeHonella)的血腔毒性，结果表明四种毒素对二者均有抑制生长和致死作 用，其毒性具有良好的时效和量效作用关系，雷氏大疣蛛毒紊对棉铃虫的胃毒活性最强， 体重抑制率达到49．58％，死亡率达到55．45％，敬钊缨毛蛛毒素对大蜡螟(Galler mellonelta)血腔注射后死亡率最高，达到87．28％，施氏单柄蛛毒素血腔注射后的体重 抑制率最高，达到87．94％。通过两种不同作用方式的比较得知蜘蛛毒素血腔注射的效 果好于胃毒效果，说明蜘蛛毒素以血腔毒性毒索为主，但也含有胃毒毒素的组分，不同 种蜘蛛毒素之间的差异则是由其成分及成分含量的差异所决定的；通过平板纸碟法对蜘 蛛毒素进行抑菌实验，结果表明雷氏大疣蛛和旌氏单柄蛛毒紊对革兰氏阴性菌犬肠杆蔺 (Escherichia coli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Smphy[OCOCCUS OUrg“S)具有+抑 菌作用，而对真菌黄曲霉菌(Aspergillusflavus sp)、产黄青霉(Penicitlium chr)，sogenum)、 白色念珠菌(Monilia albican)，茄链格孢菌(Alternaria solani)没有作用，敬钊缨毛 蛛和海南单柄蛛毒索对细菌和真菌都没有作用；肿瘤细胞四甲基偶氨哗盐(M’FT)法测 定蜘蛛毒素体外作用人胃腺癌细胞BGC．823的药敏实验，发现四种毒素均具有拥制肿 瘤细胞增殖的作用，其中以雷氏大疣蛛毒素效果最强，IC50为15．9士O．0】gg／mL，HE染 色后观察到明显的细胞形态变化，细胞出现凋亡特征；通过腹腔注射毒素的方法将蜘蛛 毒素作用哺乳动物昆明小鼠，发现雷氏大疣蛛毒索对昆明小鼠的毒性较强，LD!。为 2．83士0．03肛g／g，将该毒对小鼠以较大剂量(1099／g)腹腔注射后，小鼠表现出喘息、蜷 伏、届肢麻痹、仅靠前腿爬行、抽搐等症状，2 h后死亡。 对雷氏大疣蛛毒素成分进行分析，其中蛋白含量为78．8％。应用反相层析和阳离r 摘要■—■——■■■●■—■■■■■■■■■■●■■一I 摘要 ■—■——■■■●■—■■■■■■■■■■●■■一I I■■■●■■■■■■■■E日■■■■■■■■■■■■●■■■●●●●■■■■■■■■■■■鼍■■E!■ss■■|黑 伏、后肢麻痹、仅靠前腿爬行、抽搐等症状，2 h后死亡。 对雷氏大疣蛛毒素成分进行分析，其中蛋白含量为78．8％。应用反相层析和阳离子 交换的方法，从雷氏大疣蛛毒素中分离出一种对昆虫有毒而对哺乳动物毒性较小的抗虫 蛋白，命名为MR．EIII。SDS电泳结果显示该蛋白分子量较小，小于14kD，在 10kD左右。它对昆明小鼠毒性很小，对棉铃虫有较强的毒性，LDso为1．18士0．03 r,g／g。 关键词雷氏大疣蛛{毒素；蛋白；分离纯化；抗虫 n 暑皇_—●II 暑皇_—●II Abstract I●——鼍鼻墨—__—_■■—■■■■■■■—■鼍—目墨黑墨墨墨墨墨鼍基曼曼署曼曼墨置_奠基囊——_邕 Abstract Spider venoms are rich Sources of novel toxins，which are of interest as tools for studying neurophysilogy and as potential lead structure for insecticides and pharmaceuticals 弧e spider Macrothele raveni V,aS recently identified a new species of genus Macrothele． It is distributed in