利用数码瞬时活体显微镜系统研究TxA2信号在体内血小板异质性活化中的作用-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

利用数码瞬时活体显微镜系统研究 利用数码瞬时活体显微镜系统研究 TxA2 信号在体内血小板异质性活化中的作用 中文摘要 I I II II 中文摘要 血小板聚集和血栓的形成是导致急性冠脉综合症、脑卒中等多种血管性疾病 的直接原因。因此研究血小板在体内聚集及其活化机制对减小血栓性疾病的发生 是至关重要的。血小板的活化是由胶原蛋白，凝血酶，ADP 和 TxA2 等刺激剂通过 血小板受体介导的信号通路反应驱使的。多个血小板信号通路元素共同作用，导 致血小板聚集，凝血酶产生，最后形成一个包含有活化的血小板与纤维蛋白栓子 结构。 最近的研究报道发现，血管损伤后血小板在损伤部位形成的血栓由完全活化 的血小板（“核区域”）和低程度活化的血小板（“壳区域”）组成。这个结构 是由血小板中不同的信号网络导致血小板活化状态，排列密度以及血栓的稳定性 的不同而造成的。血栓内血小板活化的差异也反应了血小板激动剂在血栓中分布 区域的不同。研究者据此提出了血小板异质性活化理论。TxA2 是一个重要的血小 板激动剂，促进血小板的聚集和活化。阿司匹林通过抑制 TxA2 的产生抑制血小板 的活性，并已经是一个主要的抗血小板治疗途径，广泛运用于心血管疾病的治疗 与预防。但是，在血栓形成过程中 TxA2 对血小板异质性活化的作用还不清楚。 为了研究 TxA2 信号通路对血小板活化的异质性作用，我们建立了多通道高速 数码活体显微镜系统，并结合激光诱导的提睾肌微动脉血管血栓模型，通过对 TxA2 受体敲除小鼠（TP 敲除小鼠），低剂量阿司匹林给予的野生型小鼠，COX-1 低表 达小鼠进行血栓形成的研究，观察体内血小板的异质性活化。 在 TP 敲除小鼠的研究中发现，整体的血小板血栓相对于 WT 小鼠有着显著性 下降，和前期报道相吻合。然而，血栓形成过程中“核区域”的面积，即血小板 完全活化区域（P-selectin+）的面积，在 TP-/-小鼠和野生型小鼠之间并没有差异， 血栓面积的减小主要是血小板“壳区域”部分的减小造成的。这个结果表明通过 TP 受体介导的 TxA2 信号通路在血小板异质性活化中主要影响血栓“壳区域”， 但不影响血栓的“核区域”。 阿司匹林通过乙酰化环氧化酶-1 而抑制 TxA2 的产生，并且已经应用于心血管 疾病的一期和二期预防。在激光损伤血栓模型中，低剂量阿司匹林处理小鼠血小 中文摘要 利用数码瞬时活体显微镜系统研究 TxA2 信号在体内血小板异质性活化中的作用 板血栓面积的大小相对于正常饮水小鼠有着明显的下降。并且我们发现低剂量阿 司匹林处理小鼠在血栓形成的较晚时期（即拍摄后期），P-selectin 的表达延迟，说 明血栓的“核区域”被抑制。在对 COX-1 低表达小鼠的研究中也发现与阿司匹林 给药小鼠有相似的现象，血小板“核区域”与“壳区域”同时显著性下降。该结 果提示了可能有 COX-1 介导的其他信号通路在血小板异质性活化过程中起到作 用。 我们的研究首次发现了 TxA2 信号通路对血管损伤后血小板异质性活化有着重 要的调节作用。结果表明 1)通过敲除 TP 直接阻断 TxA2 信号通路后，影响了血栓 形成过程中的“壳区域” ；2)在阿司匹林和 COX-1 低表达小鼠中，“壳区域”和 “核区域”同时减小。我们的结果说明 TxA2 对血小板的招募以及对活化前血小板 的滞留非常重要，也提示了 COX-1 介导的其他信号通路可能参与血小板异质性活 化。实验结果进一步证明了血小板激动剂在血栓中空间及时间的分布对形成稳定 的血栓有着重要作用。我们的这些发现为血栓形成的机制提供了新的理论，并对 血栓性相关疾病的调控提供了实验依据。 关键词：TxA2；血小板异质性活化；瞬时数码成像显微镜； 作 者：沈 建 指导老师：朱 力 利用数码瞬时活体显微镜系统研究 利用数码瞬时活体显微镜系统研究 TxA2 信号在体内血小板异质性活化中的作用 英文摘要 I I II II To study the role of Thromboxane A2 signaling in heterogeneous platelet activation through a real-time in vivo imaging system Abstract Platelet accumulation and activation is the direct cause of many vascular disease such as acute coronary syndrome and stroke. It is so important to study the mechanism of platelet accumulation and activation to re