利拉鲁肽对高脂诱导血管内皮细胞氧化损伤的作用及 机制研究-内科学(内分泌与代谢病)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………4 英文缩写…………………………………………………………………………8 研究论文 利拉鲁肽对高脂诱导血管内皮细胞氧化损伤的作用及机制研究 前言………………………………………………………………………9 材料与方法………………………………………………………………10 结果………………………………………………………………………27 附图………………………………………………………………………29 讨论………………………………………………………………………36 结论………………………………………………………………………40 参考文献…………………………………………………………………41 综述 GLP-1对血管内皮细胞影响的研究进展…………………………………45 致谢……………………………………………………………………………53 个人简历………………………………………………………………………54 中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 利拉鲁肽对高脂诱导血管内皮细胞氧化损伤的作用及 机制研究 摘 要 糖尿病大血管和微血管并发症是糖尿病患者致死致残的主要原因， 而内皮功能损伤是其关键环节。棕榈酸是体内含量最多的游离脂肪酸， 高浓度棕榈酸可以损害内皮细胞，从而加重动脉粥样硬化进程。氧化应 激是糖尿病及其并发症的共同发病基础，其在高脂诱导的内皮细胞损伤 中起着至关重要的作用。胰高血糖素样肽（GLP-1）是一种肠促胰素， 除了降血糖作用外，还可以降低血压、体重、血脂、降低尿蛋白、改善 心功能、延缓动脉粥样硬化进展、保护血管内皮功能，改善糖尿病并发 症。有研究证实在高糖、同型半胱氨酸、糖基化终末产物（AGEs）等建 立的内皮细胞氧化应激损伤模型中，GLP-1 通过调节不同的信号通路发 挥抗氧化应激作用，从而保护内皮细胞。有研究发现利拉鲁肽可以改善 高脂诱导的内皮细胞凋亡，目前具体机制尚不明确。 本研究拟通过观察 GLP-1 类似物利拉鲁肽对棕榈酸诱导下人脐静脉 内皮细胞氧化损伤的影响，并探讨其作用机制。 目的：观察 GLP-1 类似物利拉鲁肽对高脂诱导内皮细胞氧化应激损 伤的影响及其机制。 方法：复苏并培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），将 HUVEC 分为 正常对照组（NC）、不同浓度棕榈酸组（PA0.2mmol/L、PA0.4mmol/L、 PA0.6mmol/ L），分别干预 12h、24h、48h，用 MTT 检测细胞活力，建 立氧化应激损伤模型，然后以不同浓度的利拉鲁肽干预氧化应激损伤模 型，用 MTT 检测细胞活力确定利拉鲁肽干预浓度。细胞随机分为六组： 正常对照组（NC）、棕榈酸组(PA)（0.4mmol/L）、利拉鲁肽干预组（L） （ 100nmol/L ）、 利 拉 鲁 肽 + 棕 榈 酸 组 （ L+PA ）、 Exendin 9-39 （200nmol/L）+利拉鲁肽+棕榈酸组（EX）、BAY11-7085（5umol/L）+ 利拉鲁肽+棕榈酸组（BAY）。利拉鲁肽（或 Exendin 9-39/或 BAY11- 7085）预处理 2 小时后，加入棕榈酸和/或利拉鲁肽共同孵育 24 小时。 DHE 荧光探针检测细胞内活性氧族（reactive oxygen species，ROS）水 平。相应试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶（ SOD ）、 过 氧 化 氢 酶 （CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力及丙二醛（MDA）含 量。Real Time PCR 检测 Bcl-2、Bax、caspase-3、SOD2、CAT、GPX-1 的 mRNA 表达水平，Western Blot 检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-Jun 氨 基末端激酶（JNK）、磷酸化 c-Jun 氨基末端激酶（p-JNK）、核因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达水 平。 结果： 1 MTT 检测结果 与正常对照组相比，随着棕榈酸干预浓度增加和干预时间的延长， HUVEC 细胞活力逐渐降低，棕榈酸 0.4 mmol/L、0.6 mmol/L 干预 24h、 48h 细胞活力降低明显（P0.05）。棕榈酸 0.4 mmol/L 与 0.6 mmol/L 干预 24h，两组间无统计学差异（P0.05）。与棕榈酸组相比，加入利拉鲁肽 （100 nmol/L、200 nmol/L、400 nmol/L）可以提高细胞活力，差异有统 计学意义（P0.05），但利拉鲁肽三组之间无统计学