利普司他汀菌种选育及其发酵工艺的优化-制药工程(生物制药)专业论文.docxVIP

浙江工业大学硕士毕业论文 浙江工业大学硕士毕业论文 利普司他汀菌种选育及其发酵工艺的优化 摘要 为了开发一种毒、副作用小，作用机制独特的新型高效减肥药物，国内外科研 机构和制药企业做了很多工作，我们采用发酵法生产这类药物之一——利普司他 汀。 利普司他汀是毒三素链霉菌发酵生产的一种抑制胰脂肪酶的次级代谢产物。根 据利普司他汀的生物合成途径和代谢机理，对利普司他汀产生菌毒三素链霉菌进行 推理选育，旨在获得高单位菌株。以毒三素链霉菌XC-LP．2为出发菌株，经过3 次紫外线诱变处理，分别筛选耐豆油、辛酸钠、亮氨酸的突变株，并结合自然分离 纯化，最终获得高产突变株毒三素链霉菌XC-LP-7-69，其摇瓶效价达831 I．tg／mL。 较出发菌株(310 I．tg／mL)生产能力提高了168％。传代试验表明，该菌株的高产性 能遗传特性较稳定。 用正交试验法优化了利普司他汀的发酵培养基，XC．LP一7—69的摇瓶发酵单位 提高了21．5％。从利普司他汀的摇瓶发酵着手，考察了无机盐、温度、种龄、接种 量、溶氧、剪切力、补料对利普司他汀生物合成的影响。结果表明：KH2P04和 fNI-14)2S04的最宜加量分别为0．1％和O．15％；其最佳培养温度为27。C；采用优化的 发酵配方和发酵条件，并进行中间补料，可大幅度提高发酵效价，其摇瓶效价达 1400．egmL。 以摇瓶发酵实验为基础，进行了利普司他汀发酵由摇瓶到15L发酵罐的放大， 罐上发酵效价1561 I．tg／mL。 关键词：利普司他汀毒三素链霉菌推理选育发酵补料豆油亮氨酸 浙江工业人学硕士毕业论文 浙江工业人学硕士毕业论文 利普司他汀菌种选育及其发酵工艺的优化 Abstract Lipstatin is an inhibitor of pancreatic lipases isolated from Streptomyces toxytricini．Based on the biosynthetic pathway and metabolic regulation，a rational selection procedure was performed to obtain a new lipstatin high-producing strain Streptomyces toxytricini XC-LP．2 is the parent strain．A rational screening was adopted to select a strain which could grow well on the medium wim high concentration of soybean oil．Sodium n—caprylicacid，Leucine．By above methods，a high-producing strain XC-LP-7-69 was obtained．The productivity reaches 83 1¨g／mL．which is increased by 1 68％in comparision with that of the parent stiain XC-LP一2， subculture test indicted that the hereditary character of high productivity of Streptomyces toxytricini XC-LP-7—69 was stable． Streptomyces toxytricini XC—LP一7—69、S optional medium was established by orthonormal experiment．The productivity ofXC—LP-7—69In shake flaske was raised 2 1．5％．The effects of inorganic salts，temperature， seed age，dissolved oxygen，inoculation sige，shearing strength and feeding was studiell in shake flaske．The optimal concentration of lipastation fermentation，the optimal temperature for lipstatin biosynthesis is 27。C． With the optimal fermentation medium and condition，the titer of lipstatin was increased greatly