沙蛰毒素的毒理学分析-皮肤性病学专业论文.docxVIP

中文摘要沙蜇毒素的毒理学研究 中文摘要 沙蜇毒素的毒理学研究 青岛大学医学院二OO一级皮肤性病学业 硕士研究生：史冬梅 指导教师：陈官芝 摘 要 目的：筛选有效的提取沙蜇刺胞毒素方法。比较两种方法粗提沙蜇刺胞毒素 的溶血活性(方法A粗提沙蜇刺胞毒素、方法B粗提沙蜇刺胞毒素)。将所得沙 蜇刺胞毒素进行动物实验，分析毒素的性质，为刺胞皮炎的预防和治疗提供依据。 方法：(1)方法A采取Burner改良法，方法B采取新鲜沙蜇自溶法。(2) 比较方法A和方法B两种粗提沙蜇刺胞毒素的溶血活性。取16名健康人的抗凝血 制成O．5％红细胞悬液。将每例新鲜红细胞悬液均分为16份，每份均为lml。将两 种方法粗提沙蜇刺胞毒素用10mM PBS(PH7．4)分别配制成不同浓度的6个实验 组、阴性对照组(10mMPBS，PH7．4)、阳性对照缎(10mMPBS 1．0ml和 0．5％SDS2 1-t 1)，各组均取lml，并加入lml O．5％红细胞悬液，4℃孵育过夜，分光 光度计测蛋白浓度，计算粗提沙蜇刺胞毒素的50％溶血率。比较两种方法粗提沙蜇 刺胞毒素的溶血活性。(2)将100只小鼠按照随机的方法5组，各组小鼠均经尾 部静脉注射浓度分别为2．700mg／kg、2．16 Omg／kg、1．728 mg／kg、1．3842 mg／kg、 1．106 mg／kg粗提沙蜇刺胞毒素O．5ml，观察记录小鼠注射粗提沙蜇刺胞毒素后各系 统器官的反应以及24小时小鼠的死亡数，并将死亡小鼠快速尸解，取脑、肺、肝 脏组织切片，观察组织变化。 结果： (1)两种方法粗提沙蜇刺胞毒素均可致人类新鲜红细胞溶血。两种方法粗 提沙蜇刺胞毒索的溶血活性没有区别。方法A粗提沙蜇刺胞毒素的半数溶血量为 151．89 u g／ml，95％可信区间为135．18．171．65 iJ,g／ml。 (2)粗提沙蜇刺胞毒素可以 致小鼠死亡，小鼠的半数致死量为1．60mg／kg，95％可信区间为1．42762一1．78185 mg／kg。各器官系统的观察结果发现小鼠出现静伏少动、竖毛、蜷缩、后肢伸展、 中文摘要松弛、走路蹒跚、感觉稍迟钝、心率减慢、腹式呼吸等症状，15min左右部分受试 中文摘要 松弛、走路蹒跚、感觉稍迟钝、心率减慢、腹式呼吸等症状，15min左右部分受试 小鼠开始出现抽搐死亡，大部分小鼠的死亡时间在给药后8h之前，8h后受试存活 小鼠的异常症状陆续开始恢复。组织切片结果发现脑、肝脏、心脏组织有明显的改 变。脑组织轻度水肿、脑膜小血管扩张、充血、脑膜淋巴细胞浸润。肝脏组织学观 察肝血窦扩张、淤血，肝细胞间见中性粒细胞浸润，淋巴细胞浸润。肺组织观察结 果发现，肺泡壁毛细血管、小静脉扩张充血、肺泡腔内淋巴细胞、浆细胞浸润，肺 泡腔间隔增宽，大量炎性细胞浸润。 结论：租提沙蜇刺胞毒素可以致人类红细胞溶血，两种方法粗提沙蜇刺胞毒素 溶血活性没有显著性差异。粗提沙蜇刺胞毒素和其他的剧毒动物毒素一样有溶血活 性，对小鼠具有致死性。我们对于引起刺胞皮炎的沙蜇刺胞毒素的理化性质的研 究，将对于刺胞皮炎的治疗和预防开辟一条重要的途径。 【关键词】沙蜇：刺胞皮炎；粗提沙蜇刺胞毒素；LD50。 英文摘要ToⅪNoLoGICAL 英文摘要 ToⅪNoLoGICAL STUDIES oN THE NEMAToCYST VENoM oF SToMoLoPUS NoMURAI ABSTRACT Objective To compare hemolytic activity of crude venom of Stomolopus nomurai which obtained by method A with crude venom which obtained by method B．To study on the acute toxinology ofcrude venom of Stomolopus nomurai which WaS administated to mice viai．v． Methods f1)Aliquots of lml of a 0．5％human red blood cell suspension were incubated ovemight at 4’C with different protein equivalems of crude nematocyst venom(81．6IX g／ml、102．41．t g／ml、128．0u g／ml、160u g／ml、200u g／rra、 250 u g／m1)which obtain by method A．，the dose of crude venom which obtained by method B