动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)..pptVIP

如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 * * 动物细胞与植物细胞的差别： 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同： 不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 一、动物细胞融合（细胞杂交）P52 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 5、动物细胞融合过程 (利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 病毒外壳上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。) 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后