昆布提取物J201对肺间质纤维化的作用及其机制初步研究-生药学专业论文.docxVIP

昆布提取物。1201对肺问质纤维化的作用及其机制初步研究摘要 昆布提取物。1201对肺问质纤维化的作用及其机制初步研究 摘要 J201是青岛大学附属医院提供的昆布提取物。前期实验研究表明，J201在 体外能够明显抑制人胚肺成纤维细胞的增殖，将其抑制在Go／Gl期，并且能够抑 制其蛋白质的合成，从而起到抗肺纤维化的作用。本文通过体外和体内的实验， 进一步确证了J201的抗肺纤维化作用并且探讨了其作用的机理。 肺纤维化是由于过多的成纤维细胞聚集和细胞外基质成分如胶原蛋 白过度沉积而导致的『F常肺组织结构改变和功能丧失的一类疾病。目前， 体外评价药物抗肺纤维化的细胞模型还不是很成熟，因此本文分别采用了 与肺纤维化密切相关的PDGF—BB、大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar Macrophage，AM)条件培养上清液作为诱导因子，在体外建立了评价药物抗肺 纤维化的细胞模型。成纤维细胞的增殖采用了MTT法检测，胶原的含量 采用了Sircol胶原检测试剂盒进行检测。结果显示75ng／ml的PDGF—BB 和人鼠AM条件培养上清液均能够在体外促进人胚肺成纤维细胞的过度增殖以及 胶原蛋白的过量合成，较好的模拟了体内肺纤维化形成的过程。利用这两个模型， 确证了体外50、100u g／ml的J20l能够明显的抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和 胶原的合成。 为了进一步探讨机理，我们提取了J201的主要成分，并制备了J201主要成 分的生物传感芯片(SPR)，利用生物传感器研究了J20l与PDGF—BB的相互作 用。结果发现，J201的主要成分与PDGF—BB有较强的结合。推测J201的抗纤 维化的作用可能与拮抗PDGF—BB有关。 体内采用了气管内注射博来霉素导致的大鼠肺纤维化模型，评价了J201的 抗肺纤维化作用。不同浓度J201通过灌胃每天给药，28天后经腹主动脉取I：fⅡ， 分离血清，一20℃储存备用，检测血清中IL．4、IFN—v的含量。取出肺脏，称 重后，计算肺系数，切F右肺，匀浆测定了肺组织的丙二醛、羟脯氨酸含量， 左肺投入4％的多聚甲醛中固定，常规切片，HE染色，观察肺组织病理形态学 变化。结果显示光镜下J201能够减轻肺炎症细胞浸润及纤维化的程度，肺 指数降低，治疗组较对照组肺组织上清液丙二醛、羟脯氨酸的含量均有明 显的降低，并且血清II．一4的含量降低，IFN．Y升高。我们还观察了，J201 对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞释放TNF．o的影响，结果发现其对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞释放’ⅢF一“有‘定的抑制作用。 对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞释放TNF．o的影响，结果发现其对肺纤维化 大鼠肺泡巨噬细胞释放’ⅢF一“有‘定的抑制作用。 综合体内和体外的实验结果，我们得出结论：J201能够通过抑制 PDGF—BB诱导的成纤维细胞增殖、抗氧化和抑制Th2因子生成以及肺泡 巨噬细胞释放TNF—o等多个途径对肺纤维化起到抑制作用。 关键词：J201；肺纤维化；博来霉素；人胚肺成纤维细胞：胶原；肺泡巨噬细 胞 The The Mechanisms and Effects of OkAm Extract J201 On Pulmonary Fibrosis Abstract J201，a new kind of marine sulfated polysaccharide given by Affiliated Hospital 0 f Medical College Qingdao University，was extracted from OkAm and ffactioned by some sepecial technique．It has been confirmed that J20 1 exerted its antifibrotic activity by inhibiting the synthesis of proteins and proliferation of HEPF at G0／G1 stage of cell cycle．We studied the effect of OkAm extract J20 1 on the development of puhnonary fibrosis and the possible underlining mechanisms in vitro and in vivo experiments． Fibrosis is characterized by the accumulation ofexcessive numbers offibroblasts， deposition of extracellular matrix proteins such as collagen，and d