用ImagePro Plus 分析免疫组化图片90822.pptx

用Image-Pro? Plus ( IPP ) 分析免疫组化图片 ;1.免疫组化图片分析原理;1.1光密度与灰度—迷惑人的不同概念;Gray: between white and black;Optical Density:吸收光线的物质的光学密度.;用OD值是正确的;处理照片时用的却是灰度;用标准样品才能把OD值与样品量关联到一起;1.2定量分析的指标：IOD ( Integrated option density )与density;1.3比较两张照片的染色物质量的差别;比较两张照片的染色物质量的差别;这回该怎么看？;比较体积！;1.4 实际图片的情况很复杂的。;直接比较整张图片的IOD等于在比较整张图片的mean density;哪一个染色物更多？;使用不同的area会得到不同的结论要结合病理情况来判断。;对整张图片区域进行平均的情况比较少;右上角的空白应该扣除。;也许应是这个特定的组织区域;这个区域是染色的区域。往往在计算IOD时同时计算出来，但以此为平均面积往往并不正确。;对单个细胞的分析比较;边界不清晰的贴壁细胞;细胞簇的分析;2.从图片上分析光密度方法 的技术发展;2.1测定整张照片的光密度-图象分析仪;2.2 抽样测量光密度;2.3 ImagePro plus(IPP)的独特优势。;使用IPP比前两种方法更好。;3.用IPP分析免疫组化图片过程;3.1用于免疫组化半定量分析的照片拍摄;显微镜光源;固定显微镜的工作条件;应该使用手动控制曝光的相机;控制相机曝光时间;背景的影响;较暗的背景值对分析测量的影响;扣背景后依然没有显著性差异;避免使用相机的自动白平衡;最好使用专业CCD拍摄;应当把照片存为无损压缩格式TIFF;总结拍摄注意事项：;3.2用Image-pro plus分析免疫组化图片;3.2.1开始使用IPP;;将分析图片信息保存到数据库中;3.2.2.设置并保存测量条件;3.2.2.1光密度校正方法;;;;校正光密度步骤小结.;3.2.2.2选择测量参数;选择测量参数;在count/size里进行这些设置;调出的select Measurements,;Option设置窗口;保存设置:file – save settings;3.2.2.3选取特定颜色所在的区域;用IPP选取特定颜色区域的工具;在count/size窗口中点select color,就调出了这个segmentation工具.;点Histogram Based,还要选HIS.;在弹出的警告上点“是”。;H：0-30，S：0-255，I：0-230;设置好的选色条件也要保存的???;测量光密度时，要测量灰度图片;选择Transparent on White，只显示选择到的区域。再点create preview image复制出一张。;将复制的图片转换成灰度图片。;对此图片再作一次选色，这次只需选择一个强度了。I：0-230;;还要保存一次灰度选色设置。;3.2.2.4 好啦，点count进行测量。;看看测量统计数据。;可以把数据存入excel表格里。;3.2.2.5别急，还没完事呢。;在需要测量整张照片染色的时候，面积就是照片面积。;如果切片只拍摄了一部分，空白处的面积则需扣除。;很多情况下，是要测量某一组织区域内的光密度。;可以使用irregular AOI工具来选择测量区域。;选择一个区域后，点New AOI再选择下一个区域。最后按下图点就行了。;点了convert to object后马上就能看到测量数据。注意这里只有area值有意义。;3.2.3免疫组化照片测量结果的统计分析;