第六讲(3)花药(花粉)培养技术.pptVIP

花药(花粉)培养 花药和花粉培养技术 花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的过程。 一、花药和花粉的培养方法： （一）花粉发育时期： 1、适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期) 2、花粉发育时期的检测： 外部形态观察：(单核靠边期的花粉) 小麦旗叶和旗叶下一叶之叶耳距离约是5～15cm。 烟草中，花蕾的花冠大约与萼片等长。 压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。 （二）培养过程 （二）培养过程 （二）培养过程 （二）培养过程 4）培养形成花粉植株。 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗 （二）培养过程 4）培养形成花粉植株。 培养方式： ①琼脂固化培养基表面培养 ② 30%Ficoll的液体培养基表面漂浮培养 ③固-液双层培养 花药培养脱毒技术 1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期 单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 生根培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L 草莓花药愈伤组织,花药植株 2、花粉培养 花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点： 胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点： 花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养 花粉培养过程 二、培养基 （一）基本培养基： B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。 三、单倍体植株染色体加倍的方法 1、自然加倍：花粉细胞核有丝分裂或核融合，染色体可自然加倍，获得纯合二倍体。 2、人工加倍：用秋水仙素处理单倍体植物，可使染色体加倍（溶液浸苗、处理愈伤组织和用含0.4%秋水仙素的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实的二倍体植株） 3、将单倍体植株诱导的愈伤组织反复继代培养，再分化可得到二倍体植株。 花药和花粉培养的应用 ----单倍体植株育种 1、克服后代分离，缩短育种周期； 2、有利于筛选隐性突变体，选择效率高; 3、有利于隐性基因控制性状的选择 4、快速获得自交系的超雄株 本章小结： (1)花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养。 (2)花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。 (3)花药培养包括：选择材料-消毒-接种培养-愈合组织生成-分化出单倍体植株。 (4)花粉培养包括花粉的分离-预处理-培养过程。 * * 第一节 花药和花粉培养技术 油菜成熟花药的结构 第一节 花药和花粉培养技术 雄配子体的发育 营养细胞 生殖细胞 精子 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药和花粉培养技术 1 花药培养过程 1）预处理:低温冷藏是最常用的方法 烟草7～9℃ ，7～14d 黑麦1～3℃ ，7～14d 第一节 花药和花粉培养技术 2）表面消毒 用70%酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶鞘表面，即可以达到灭菌的要求。 第一节 花药和花粉培养技术 3）接种 在无菌的条件下把雄蕊上的花药从花丝上摘下，水平地放在培养基上进行培养。 不要使花药受到损伤，否则会刺激花药壁形成二倍体愈伤组织。 接种的“密度效应”，要有一个合理的群体数量。 第一节 花药和花粉培养技术 选幼年树花蕾 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药和花粉培养技术 水稻花药培养过程： 旗叶鞘用70％酒精擦洗一遍 剥去旗叶鞘，取出稻穗 10％漂白粉10 min 无菌水洗3次 培养5天，花药变褐，20天后花药裂开，长出淡黄色的花粉愈伤组织，先长芽，后长根，形成幼苗。 用接种环接种到培养基上 左手持穗，右手用镊子取花药，放无菌培养皿中 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药和花粉培养技术 取花蕾（镜检） 预培养数天 取花药 消毒 分离花粉 接种 培养 愈伤组织发生 第一节 花药和花粉培养技术 基本培养基 激素种类和浓度 蔗糖浓度 第一节 花药和花粉培养技术 第一节 花药