山西省血友病A基因诊断初步分析-血液病学专业论文.docxVIP

生堕垦登垄兰———』墅兰兰堡垒!L山西省血友病A基因诊断初步研究 生堕垦登垄兰———』墅兰兰堡垒!L 山西省血友病A基因诊断初步研究 中文摘要 ／血友病A(Hemophilia A,m，，又称先天性或遗传性因子Ⅷ缺陷 症。迪因凝血因子Ⅷ基因缺陷，导致因子Ⅷ分子结构异常或含量减少而 产生的一种临床上较常见的遗传性出血性疾病，其遗传特点是：x染色 体隐性遗传，女性为携带者，男性发病，发病率为1／5000～i／10(}00， 且发病无种族特异性。临床表现为不同程度的皮肤、粘膜、软组织、关 节、肌肉及内脏各器官的出血。出血的程度和频率与血浆因子Ⅷ活性水 平高度相关。 随着分子生物学及遗传技术的深入开展，对因子Ⅷ基因结构异常的 遗传机制有了较深入的认识，因子Ⅷ基因位于x染色体长臂末端， (Xq28)，长186kb，由26个外显子和25个内含子组成。因子Ⅷ基因 突变具有异质性，目前已发现有500余种，主要类型有；缺失、插入、 重复、点突变、倒位。探讨血友病A发病的分子机理，研究其分子生 物学改变，为血友病A携带者的检出、产前诊断及遗传咨询均具有重要 生曼垦壁查兰—．塑兰!竺：堕的临床意义。 生曼垦壁查兰—．塑兰!竺：堕 的临床意义。 目前国外及国内上海、北京、苏州等地己开展了血友病A的基因突 变检测及诊断，既往山西省对于血友病A仅限于粗略的统计报道和临床 对症治疗，但对于血友病A发病的分子机理未曾做过系统、深入和全面 的研究，尤其是在血友病A的基因突变的检测及基因诊断方面更是空 良y 本课题属临床分子生物学研究范畴，旨在初步研究山西省重型血友 病A内含子22倒位，并用该基因缺陷直接进行家系的携带者检测，同 时利用I)NA多态性联合运用多个遗传标志进行家系遗传连锁分析，为今 后血友病A临床遗传咨询，基因诊断提供可靠依据。 研究对象选自2001年3月～2001年10月山西医科大学第二医院、 省儿童医院、省人民医院等各大医院初诊及复诊24例血友病A患者， 及部分家系的成员14人。24例患者中有明确家族史的15例，散发9 例。 r ／运用血浆凝固法‘一期法’进行凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：c)检测， 用ELISA方法检测vWF：AS水平。使用QIAGENE公司的试剂盒提取基 因组DNA，分别设计各种引物，进行PCR反应及产物电泳分析。 根据FⅧ活性水平进行分型伊Ⅷ：c1％为重型，FⅧ：C1％～5％为中 型·FⅧ：C5％～25％为轻型，FVi：c 25％～50％为亚临床型)。检测的24 2 生里垦登垄量 生里垦登垄量 翌主茎堡垒生 例血友病A患者中有14例为重型，8例为中型，2例轻型，所有血友病 A患者vWF：Ag均在正常范围。 应用LD～PCR(Long Distance—Polymerase Chain Reaction LD—PCR)检测FⅧ基因内含子22倒位，结果14例重型血友病A中，7 例患者确定为内含子22倒位，占50％(7／14)，与国内外有关文献报道 一致，运用该基因缺陷直接为其中两个家系的3名女性成员进行检测， 结果均为携带者。联合应用Stl4，BclI，intronl3和intron22STR位点等遗 传标志对两个血友病A者及其家系成员14人进行遗传连锁分析，结果： 家系C中一名女性确定为携带者，家系D中两名女性确定为携带者， 一名为正常人。 运用长距离DNA扩增技术(LD—PCg)可快速简便测定内含子22 倒位这一基因缺陷，检测准确率高，为姒的基因诊断开辟了一条新途 径。中国人群中的血友病A内含子22倒位检测率为47．6％，与文献报 道大致相符，本文报道的山西省重型血友病A的患者中50％为内含子22 倒位，可见该机制所致血友病在中国人群中的发病率是较高的，这样可 以通过赢接检测内含子22倒位对半数的中国人重型血友病A家系进行 携带者检测与产前诊断。直接检测的最大优点在于其特异性，只要得到 阳性结果即可得出明确而肯定的诊断。被测家系只要有一名患者或携带 者存在明确倒位现象，整个家系的任一成员即可通过该检测确定其疾病 状态。散发家系基因突变的构成与有家族史者相似，对于此类家系，无 ， 生塑堡登查兰塑主堂堡坠法用多态性进行基因诊断，此时，内含子22倒位的直接检测体现出其 生塑堡登查兰塑主堂堡坠 法用多态性进行基因诊断，此时，内含子22倒位的直接检测体现出其 优越性。建议在对血友病A家系进行遗传咨询时应将内含子22倒位的 检测作为首选筛查方法。 由于FⅧ基因庞大，其基因突变存在显著的遗传异质性，因此如果 对每一例血友病A家系常规进行突变的直接检测，不仅费时费力，而且 实验成本高，不适合临床常规检测，临床上为血友病家系提供咨询时， 只需确定被检测者的疾病状态，而可以不明确具体突变性质，故依赖遗 传多态性连锁分析对临床血友病A家系的检测是