施氏鲟早期性腺分化过程中性激素水平及其受体基因的时空表达分析-水产养殖专业论文.docxVIP

上海海 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 滕春波 东北林业大学 教授 答辩主席 尹家胜 黑龙江水产研究所 研究员 答辩委员 刘伟 黑龙江水产研究所 研究员 答辩委员 张震 黑龙江水产研究所 副研究员 答辩秘书 答辩地点 黑龙江水产研究所 答辩日期 2015.06.05 施氏鲟早期性腺分化过程中性激素水平及其受体基因的时空 表达分析 摘 要 施氏鲟是我国重要淡水特产鱼类，具有极高经济价值。目前，我国已是世界 养鲟大国，施氏鲟作为本土养殖品种具有重要的研究意义。随着高附加值鲟鱼子 酱的开发及其优质苗种的需求，市场迫切需要优质雌鱼。然而施氏鲟性成熟较晚、 无副性征，生产中雌雄同养的局面严重制约其产业发展。因此，本研究以施氏鲟 早期性腺发育过程为研究切入点，运用组织学、内分泌学及分子生物学等研究手 段，研究早期性腺分化过程中，酶，性激素水平变化规律及性激素受体的时空表 达规律，并比较了早期性腺分化敏感期 Kisspeptin 脑室注射对雌激素受体基因 （ER）和雄激素受体基因（AR）表达影响。从而解析施氏鲟早期性腺发育过程 中的分子调控机制。结果与结论如下： 1. 施氏鲟胚胎发育的卵黄栓期及心搏期可溶性蛋白含量最低，孵出前期维持 在较高水平、最高值出现在视泡期，且均存在显著性差异（P＜0.05）；睾酮（T） 含量显著降低，17β-雌二醇（E2）含量在孵出前期显著升高（P＜0.05），且均 在孵出前期有一峰值；酸性磷酸酶(ACP)、还原型谷胱甘肽（GSH）含量先降低 而后显著升高（P＜0.05），过氧化氢酶(CAT)活性呈显著升高趋势（P＜0.05）， 碱性磷酸酶(AKP)活性变化不大，丙二醛（MDA）含量始终维持在较低水平心搏 期后呈上升趋势，超氧化物歧化酶(SOD)活性在卵黄栓期显著降低随后趋于稳定。 研究表明：施氏鲟胚胎发育阶段已经具备一定的性激素合成能力；各种免疫相关 酶在胚胎发育阶段所起作用不同，胚胎在神经胚期的高死亡率与其受氧化损伤较 大有关。 2. 施氏鲟幼鱼生长阶段与性腺分化过程中性激素含量及性激素受体基因(ERα, ERβ, AR)表达变化。仔鱼孵出 7 天、14 天时雌二醇、睾酮含量显著高于其他时期， 且雌二醇含量显著高于睾酮含量，这与其他时期雌二醇显著低于睾酮含量的规律 不一致，说明在 7—14 天这个时间段仔鱼的生理活动存在明显的变化。施氏鲟脑 与性腺 AR、ERα 表达量均呈先降低后升高的趋势。性腺分化结束后（190 天）， 脑部 AR 表达量显著高于性腺分化期间表达量。推测 AR 在施氏鲟性腺分化结束 I 后对脑的分化发育仍具有特殊的功能。脑部 ERβ 基因表达量呈先升高后降低的趋 势，而性腺 ERβ 基因表达量随分化的进行呈明显降低的趋势且差异显著。 3. 施氏鲟性腺分化期注射 kiss1、kiss2 多肽对性激素含量及性激素受体基因 (AR ,ERα, ERβ)表达的影响。注射 kiss1 组脑部与性腺雌二醇含量随注射次数增加 而递增，睾酮含量在三次注射后显著降低。注射 kiss2 组脑部与性腺在初次注射 和 3 次注射后含量形成峰值，脑部雌二醇、睾酮含量波动幅度显著低于性腺雌二 醇、睾酮含量变化幅度。注射 kiss1 对脑与性腺 AR 表达量无明显影响；对脑部 ERα 表达起抑制作用，性腺 ERα 表达在 3 次注射后形成表达小高峰；性腺 ERβ 在 2 次注射后达到表达高峰。注射 kiss2 组脑部 AR 表达量初次注射后降低，3、4 次注射后逐渐升高，性腺 AR 表达量在前 3 次注射呈显著降低趋势；脑部与性腺 ERα 表达量在初次注射后均有所上调，3、4 次注射后性腺 ERα 表达量逐渐升高， 显著高于初始水平； 关键词：施氏鲟；免疫指标；性激素受体；kisspeptins；性腺分化 II Expression of sex hormone receptors (ERα, ERβ, AR) during early stage of Acipenser schrenckii gonadal differentiation ABSTRACT Amur sturgeon (Acipenser schrenckii), which is also called as living fossil, is one of the most primitive Actinopterygii species. Amur sturgeon is a riverine resident sturgeon species, distributed in the Amur River、Songhua River a