拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究-神经病学专业论文.docxVIP

拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究拉奠三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究 拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究 拉奠三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究 研究生：郭文超 导师：易咏红教授 陆雪芬教授 广卅I医学院神经科学研究所广州医学院第二附属医院 广州市昌岗东路250号(510260) 中文摘要 新生儿缺血缺氧性脑病(hypoxic—ischemic—encephalopathy，HIE)是儿童神 经系统疾病中的常见病，兴奋性氨基酸毒性作用是HIE重要发病机制。兴奋性氨 基酸拮抗剂的脑保护治疗被认为是一条有效的治疗途径，但目前大多数兴奋性氨 基酸拮抗剂因具有明显的毒副作用而难以在临床推广。研究表明拉莫三嗪 (Lamotrigine，LTG)具有神经保护作用，但LTG对HIE的神经保护作用及其疗 效与用药时间、剂量的关系则未见报道。本研究采用新生大鼠HIE模型，通过尼 氏染色、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和原位末端标记等方法，观察LTG对 缺血缺氧24h后新生大鼠前脑的病理改变，脑含水量变化，血清神经元特异性烯 醇化酶(NSE)浓度改变，以及皮层NSE免疫组化和原位末端标记凋亡阳性细胞数 的影响，探讨LTG对HIE的保护作用及其疗效与时间、剂量的关系，为临床治疗 提供依椐。 材料与方法： 本实验选用新生7天健康SD大鼠112只，随机分为单纯缺血缺氧组14只， 假手术对照组14只，LTG治疗组84只。LTG治疗组又分为A、B两组，A组为剂 量观察组，即缺血缺氧后(术后)3h分别以LTG 5、10、20、40mg／kg腹腔注射， B组为时间观察组，即缺血缺氧前(术前)lh、术后3、6h分别以LTG 20mg／kg 腹腔注射(纯拉莫三嗪粉与0．5％甲基纤维素按lmg／ml浓度制备成混悬液，纯拉莫 三嗪粉由葛阑索威康公司提供)。 广州医学院2000级研究生 拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究缺血缺氧方法及标本制备：新生大鼠乙醚吸入麻醉，颈部正中切口，分离左 拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究 缺血缺氧方法及标本制备：新生大鼠乙醚吸入麻醉，颈部正中切口，分离左 侧颈总动脉，用5-0丝线结扎并剪断血管，术后2—3h移入37。C水浴密闭缺氧箱， 持续充以8％0：与92％N。混合气体(0．5L／m1)，持续缺氧2h后，打开缺氧箱恢复自 然通气，继续37℃保温1h，然后放回母鼠笼里喂养。假手术组只分离新生大鼠左 侧颈总动脉，不作结扎和缺氧处理。假手术组和缺血缺氧组均予等量甲基纤维索 腹腔注射。24h后各取8只动物断头取脑、取血，干湿重法测量左侧大脑皮层脑 含水量；酶联免疫吸附法测血清NSE浓度；另外取6只常规灌注固定，取脑，冰 冻切片，行NSE免疫组化和相邻片Nissl染色、TUNEL法原位末端标记。 结果： 1)假手术组(n=8)和单纯缺血缺氧组(n=8)脑含水量测定分别为77．2±1．2％ 和92．4±0．8％，单纯缺血缺氧组显著增高(P0．01)；LTG≥lOmg／kg各治疗组 脑含水量较缺血缺氧组显著降低(P0．01)，各剂量、时间组间比较无显著差异， 仍高于假手术组。 2)Nissl染色结果显示假手术组组织结构清晰，细胞轮廓清楚，核居中，尼 氏体位于胞浆的周边，呈环状，细胞突起清晰可见。单纯缺血缺氧组病变较重， 24h病变侧大脑皮层、海马结构等部位出现多灶性、范围较大的细胞核偏移、核 固缩或核碎裂，细胞溶解或消失，尼氏体减少或消失等现象。LTG治疗组A组中 ≥20 mg／kg各组，随治疗剂量的增加，左侧大脑皮层、海马及纹状体的病变范围 及程度均有不同程度的减轻。 3)NSE免疫组化显示假手术对照组皮质区可见NSE阳性细胞，缺血缺氧组仅 见卜2个／Hp散在NSE阳性细胞，LTG治疗A组中20mg／kg、40mg／kg组左侧大脑 皮层NSE阳性细胞较假手术组显著减少，但仍显著高于缺血缺氧组；B组各组NSE 阳性细胞数均低于假手术组，术前lh用药组较术后3h、6h组显著增高(pO．01)， 3h和6h用药组之间无显著差异。 4)血清NSE含量测定显示假手术对照组含量为25．5±1．8肛g／m1，缺血缺氧 24小时后血清NSE含量显著增高达103．3±3．3¨g／ml，两者差异显著(P(0．001)。 LTG治疗A组中20、40mg／kg血清NSE含量较缺血缺氧组显著降低(pO．01)， 至 40mg／kg组降为32．4±1．7pg／ml，仍高于假手术对照组。B组NSE含量均低于缺 2 广州医学院2000级研究生 拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研究血缺氧组，术前1h用药组较术后3h、6h组显著降低，3h和6h用药组之间无显 拉莫三嗪对新生鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用研