桑树苯丙氨酸解氨酶和MYB转录因子基因克隆与表达分析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

摘要 摘 要 苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase, PAL, EC ）是催化植物次生 代谢途径中苯丙烷类代谢的第一个关键酶。PAL与植物的生长发育和自身防御紧密相 关。本文运用简并引物经RT-PCR方法从桑树（Morus L.）幼叶中分离到一段约360bp 的PAL基因cDNA片段，再经RACE（Rapid amplification of cDNA ends）技术获得了该 序列的3’和 5’端cDNA序列。该cDNA全长2615bp，命名为MaPAL，GenBank登录号为 HQ025956，包含一个2181bp的完整开放阅读框（ORF），编码一个726个氨基酸的多肽。 氨基酸序列比对显示桑树MaPAL与目前已报道的其他植物PAL有82%以上的相似性。 系统进化树显示MaPAL基因与来自覆盆子、甜樱桃、西洋梨的PAL基因亲缘关系较近。 基因表达分析显示，MaPAL基因表达在桑树不同种质中表现出一定的差异；在桑树各 被测部位中均有表达，其中幼根和成熟的紫桑椹中表达量明显高于其他部位；与对照 相比，在家蚕取食、紫外光（200~275nm）、机械损伤、低温、钠盐等胁迫下其表达量 均有不同程度的升高，尤其是紫外光诱导最明显。 转录调控是植物生长发育、信号转导、抗逆性等基因表达的最主要调控形式，转 录因子是参与基因转录水平调控过程的重要因子。MYB 转录因子是植物转录因子中 最大的家族之一，可以特异的识别结合基因启动子中的 MYB 顺式作用元件，调控生 物或非生物胁迫相关的一系列基因表达。本文采用简并引物经 RT-PCR 方法从桑树幼 叶中分离到一段约 250bp 的 MYB 转录因子基因 cDNA 片段，再经 RACE 技术获得 了该序列的 3’和 5’端 cDNA 序列。该 cDNA 全长 954bp，命名为 MaMYB，GenBank 登录号为 HQ025957，含有一个 783 bp 的完整开放阅读框（ORF），编码 261 个氨基 酸残基。氨基酸序列比对显示含有 MYB 转录因子的两个保守结构域，保守区包含多 个 DNA 结合位点，与其他物种 MYB 转录因子氨基酸序列相似性达 70%以上。系统 进化树显示，MaMYB 基因与来自蛇麻、毛果杨、蓖麻的 MYB 转录因子基因亲缘关 系较近。MaMYB 基因在桑树不同种质和各被测部位表达量相近；与对照相比，在家 蚕取食、紫外光（200~275nm）、机械损伤胁迫下其表达量变化不大，在低温下其表 达量略有下降，在钠盐胁迫下其表达量略微升高。 关键词 桑树；苯丙氨酸解氨酶；MYB转录因子；基因克隆；表达分析 I Abstract Abstract Phenylalanine ammonia-lyase (PAL, EC ) is the first key enzyme of phenyl- propanoid metabolism in plant secondary metabolism and plays important roles in regulating plant development and defense. A PAL gene fragment of 360 bp was isolated from young mulberry leaf by RT-PCR using degenerated primers. Then its 3’and 5’ flanking sequences were obtained using rapid amplification of cDNA ends (RACE) and got its full-length cDNA sequence, which we designated MaPAL (GenBank accession: HQ025956). Sequence analysis showed that MaPAL is 2615 bp in length and contained a complete open reading frame (ORF) of 2181bp encoding 726 amino acids. Amino acids sequence alignment revealed that MaPAL shared more than 82% identity with the PAL sequences reported in other plants. Phylogenetic tree analyses showed that MaPAL gene had a very close relationship with PAL gene from