硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡机制的研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 书 脊 的 书 写 学位论文的书脊用小三号仿宋字书写，上方写论文题目，下方写申请人姓名， 距上下页边均为 5cm，如下图： 页边 5cm 学 号 题 目 姓 名 5cm 页边 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别 加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或 撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已 在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由 本人承担。 论文作者签名＿＿＿＿＿ 论文导师签名＿＿＿＿＿ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国 家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本 人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本 学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。 （保密论文在解密后应遵守此规定） 论文作者签名＿＿＿＿＿ 论文导师签名＿＿＿＿＿ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要 宁夏医科大学硕士学位论文 中文摘要 硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡机制的研究 摘 要 目的：通过观察不同浓度硫酸铍（BeSO4）对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）凋亡率、凋亡 相关基因表达水平、胞内三磷酸肌醇受体（IP3R）及其配体肌醇三磷酸（IP3）含量以及 i4胞内钙离子浓度([Ca2+] )的改变，探讨 BeSO i 4 是否通过 IP R Ca2+通道影响细胞凋亡，同 3时观察 IP3R 拮抗剂和激活剂干预后人胚肺细胞凋亡率变化。 3 i方法：体外培养 MRC-5 细胞，分为空白对照组、低中高 BeSO4 染毒组、BeSO4+2-APB 组及 BeSO4+IP3 组等 6 组。BeSO4 低、中、高剂量组浓度分别为 1、10、100μmol/L，2-APB 组 和 IP3 组剂量为 10μmol/L+10μmol/L BeSO4。细胞生长至对数生长期，达到细胞密度后， 根据实验需求，加入药物分别培养 24h 和 48h 后收集细胞。进行以下实验：1.流式细胞 术检测细胞凋亡率；2.实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测 IP3RⅢ、 bcl-2、bax、Caspase-3 mRNA 的表达；3.ELISA 法测定细胞内 IP3RⅢ及 IP3 含量变化； 4.激光共聚焦法检测胞内[Ca2+] 。 i 结果： 1. 24h 和 48h BeSO4 低、中、高剂量组与同时相空白对照组相比，MRC-5 细胞凋亡率有 不同程度下降（P﹤0.01）；BeSO4 低、中、高剂量组染毒 24h 和 48h 后与同时相空白对 照组相比，MRC-5 细胞 Bcl-2 mRNA 表达升高，Bax 和 Caspase-3 mRNA 表达降低，Bcl-2/Bax 比值升高（P﹤0.05，P﹤0.01）； 2. 24h 和 48h BeSO4 低、中、高剂量组与同时相空白对照组相比，MRC-5 细胞 IP3RⅢ mRNA 表达均升高（P0.05，P﹤0.01）；但 ELISA 结果未发现相应组别 IP3RⅢ蛋白含量增多 （P0.05）；其配体 IP3 在 BeSO4 染毒 MRC-5 细胞后较同时相空白对照组有不同程度升高， 但差异无显著性（P0.05）； 3. 24h BeSO4 高剂量组与同时相空白对照组相比，Ca 2+含量升高（P0.05）；48h BeSO 4中、高剂量组与同时相空白对照组相比，Ca2+含量降低（P0.05）； 4 I 4. 拮抗剂和激活剂干预影响：24h 和 48h BeSO4+2-APB 组与同时相 BeSO4 中剂量组相比， MRC-5 细胞凋亡率下降（P﹤0.05），且低于同时相空白对照组（P﹤0.01）；24h 和 48h BeSO4+IP3 组与同时相 BeSO4 中剂量组相比，MRC-5 细胞凋亡率升高（P﹤0.05），但仍低 于同时相空白对照组（P﹤0.01）；24h 和 48h BeSO4+IP3 组与相应时相 BeSO4 中剂量组相 比，MRC-5 细胞 IP3 含量均升高，差异有统计学意义（P﹤0.01）；24h 和 48h BeSO4+2-APB 4组与同时相 BeSO 中剂量组相比，Ca2+ 4 含量降低（P0.01），且低于同时相空白对照组组 （P0.05，P0.01）；24h 和 48h BeSO4+IP3 组与同时相 BeSO4 中剂量组，Ca 2+含量升高 （P0.05，P0.01）。 4结论：