联检食品中五种常见沙门氏菌血清型的胶体金免疫层析方法的研究-食品工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 摘要 摘 要 沙门氏菌（Salmonella spp.）是一种能引起人畜共患病的食源性致病菌。该 菌可通过食物、饲料、动物粪便和人等进行传播。在世界各地的食物中毒事件中 由沙门氏菌引起的中毒病例占第一位。沙门氏菌常引起人类急性腹泻、呕吐、腹 部疼痛、高烧和败血症等疾病。因此，快速准确地检测沙门氏菌具有重要意义。 传统的沙门氏菌检测技术需 4~7 天，费时耗力。目前，针对沙门氏菌的快速检测 方法多种多样，例如多重 PCR、生物芯片、酶联免疫吸附技术等。但这些技术 往往需要用到昂贵的仪器或复杂的实验操作，不利于向基层推广。针对以上问题， 本文以胶体金为示踪标记物，对联检五种常见沙门氏菌血清型的免疫层析方法进 行研究。 本文以鸭沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌 和鼠伤寒沙门氏菌为检测目标菌将抗沙门氏菌的 27 株单抗相互配对，筛选出针 对鸭沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的配对抗 体：8H10-B3 和 5G6-D7 及针对猪霍乱沙门氏菌的配对抗体：11D8-D4 和 9G6-A4。 四株单抗的效价分别为 1:640000、1:2560000、1:2560000 和 1:1280000。以单抗 8H10-B3 和 11D8-D4 分别标记胶体金，单抗 5G6-D7 和 9G6-A4 混合抗体以及驴 抗鼠 IgG 喷涂于硝酸纤维素膜上分别作为检测线（T 线）和质控线（C 线），初 步建立了联检五种沙门氏菌血清型的免疫层析试纸条的快速检测方法。沙门氏菌 胶体金试纸条最佳实验条件如下：单抗 8H10-B3 和 11D8-D4 的最佳标记量为 15 μg/mL 和 5 μg/mL，5%的酪蛋白能有效地封闭金颗粒上的剩余位点；NC 膜上 T 线混合抗体浓度(5G6-D7+9G6-A4)为(1.5+2.0) mg/mL，质控线驴抗鼠二抗浓度为 1 mg/mL；单抗 8H10-B3 和 11D8-D4 的单次金标抗体用量均为 2 μL。金标抗体 与菌的最佳体外孵育时间为 5 min，试纸条的检测时间为 15 min。在最佳实验条 件 下 ， 沙 门 氏 菌 的 最 低 检 测 灵 敏 度 为 ： 鸭 沙 门 和 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 为 1×106 CFU/mL，猪霍乱、肠炎和甲型副伤寒沙门氏菌为 1×105 CFU/mL。特异性结果 表明该试纸条与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌略有交叉。该试纸条应用于纯牛奶和 生鸡蛋样本的检测时，沙门氏菌接种量为 5~50 CFU/25 g，增菌 19 h 后用本方法 进行检测，五株目标菌都能获得阳性结果。 关 键 词 ： 沙门氏菌 ； 单 克 隆 抗 体 ； 胶 体 金 ； 联 检 ； 食品基质；免疫层析 I Abstract ABSTRACT Salmonella spp. is a kind of food-borne pathogen, which can infect humans and animals through contaminated food, feed, animal manure and infected person. Salmonella spp. causes the greatest number of food poisoning all around the world, which often leads to acute diarrhea, vomiting, abdominal pain, fever and septicemia. Thus, detecting Salmonella spp. in a fast and accurate way has important significance.Traditional detection methods of Salmonella spp. would cost 4~7 days, and it is time consuming and laborious. At present, various rapid detection methods have been developed for Salmonella spp., such as multiplex PCR, Microarray and Enzyme-linked immunosorbent assay. However, most of these methods need to use expensive equipments or complex experiments, which make it difficult in promoting in b