硫化氢上调leptin通路抑制自噬拮抗甲醛诱导的神经毒性-神经病学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 硫化氢上调 leptin 通路抑制自噬拮抗甲醛 诱导的神经毒性 论文作者签名: 指导教师签名: 论 文 评 阅 人 1 ： 唐小卿， 教授， 硕导，南华大学 评阅人 2： 顾洪丰，副教授，硕导，南华大学 答辩委员会主席： 汤永红，教授，硕导，南华大学附属第二医院 委员 1： 邹伟， 教授，硕导，南华大学附属南华医院 委员 2：胡新平，教授，硕导，衡阳市中心医院 委员 3： 谢明， 教授，硕导，南华大学附属第一医院 委员 4：聂亚雄 , 教授，硕导，南华大学附属第一医院 委员 5： 游咏， 教授，硕导，南华大学附属第一医院 答辩日期： 2015 年 05 月 07 日 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或 证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了 明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读 （博/硕）士学位期间在导师指导下完成 的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单 位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分 内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有 关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数 据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权 益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数 据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用 该授权。 作者签名： 导师签名： 年 月 日 年 月 日 硫化氢上调 leptin 通路抑制自噬拮抗甲醛诱导的神经毒性 研 究 生：王 浩 指导老师：游 咏 教授 唐小卿 教授 摘要 研究背景与目的: 甲醛（Formaldehyde, FA）是一种有害气体，其神经毒性包括许多 神经退行性变，实验室研究发现 FA 还可以导致神经细胞的凋亡。目 前，我们已经证实：新型气体信号分子硫化氢（Hydrogen sulfide, H2S）能拮抗 FA 的神经毒性，机制包括抑制内质网应激，氧化应激 等，但其深入的作用机制及信号通路仍未完全阐明。自噬 （autophagy）是溶酶体吞噬陈旧细胞器或蛋白并降解的过程，以藉此 实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。但长期过度的自噬会 损伤细胞并最终引起凋亡。瘦素（leptin）是一种小分子多肽类激素， 近年来研究报道，leptin 参与了多种神经功能调节，并发挥了神经保护 作用。 为此，我们使用 PC12 作为神经细胞模型，从自噬和 leptin 方面探 讨 H2S 抗 FA 诱导的神经细胞毒性的作用机制。 方法: 使用 CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测细胞活力；双染流式细 胞术检测细胞凋亡；ELISA 法检测凋亡蛋白 Caspase-3 活性；免疫荧光 法观察 LC-3 的表达；Western Blot 检测 leptin，beclin-1，LC-3 和 PARP 的表达。 I 结果: 1.甲醛诱导自噬促进神经细胞凋亡 PC12 细胞予以不同浓度 FA（FA, 60, 120, 240 μM）处理 24h，结 果显示三种浓度 FA 均能诱导 PC12 自噬的发生，并不同程度提升了 PC12 细胞的凋亡率，自噬活性及 PC12 细胞凋亡率与 FA 浓度呈正相 关。 2.硫化氢通过抑制自噬活性拮抗甲醛诱导的神经毒性与细胞凋亡 PC12 细胞用 NaHS（100、200 和 400μM）预处理 30min 后，再加 入 FA（120μM）共处理 24h，H2S 可减轻 FA 对神经细胞凋亡的诱导 作用，并减轻其自噬活性。 3. 硫化氢能恢复甲醛抑制的 leptin 活性 NaHS 以 100、200 和 400μM 的浓度预处理 PC12 细胞 24h 后，加 入 FA（120μM）共处理 24h，与 FA 损伤组相比，H2S 恢复 FA 对 leptin 活性的抑制。 4.阻断 leptin 通路可逆转硫化氢拮抗甲醛诱导的神经毒性 与细胞 凋亡 Leptin 阻断剂预处理 PC12 细胞 30min 后，加入 200μM 的 H2S 预 处理 30min，再加入 FA 120μM 共处理 24h。H2S 对