PCR的环境微生物检测-侯森课题组-暨南大学.ppt

第19章 微生物监测技术的新发展 第二节 微生物传感器在环境监测中的应用 二、微生物传感器在环境监测中的应用 微生物传感器检测环境化学物质的特异性取决于微生物对底物利用的选择性。 1. 乙醇测定（固定化毛孢子菌） 2. BOD分析 THANKS! * * * * * * 环境微生物学 侯森 暨南大学环境学院 Tel E-mail：hs0010910@jnu.edu.cn 第四篇 微生物监测环境 第18章 污染物致突变性的微生物检测 传统动物实验与人群流行病学调查 短期生物学试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 一、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验） （一）原理 正向突变 野生型his+→→→→→→营养缺陷型his- 回复突变 试验菌株：组氨酸营养缺陷型 哺乳动物微粒体酶：大鼠肝匀浆 （二）试验方法 纸片点试法 平皿渗入法 其他方法 第一节 基因突变试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 二、发光细菌试验 （一）原理 正向突变 发光细菌 →→→ 暗变异株 回复突变 试验菌株：费氏弧菌等暗变异株 回复原理：DNA损伤 （二）试验方法 液体培养法：发光强度3x对照管；阳性结果≥3（5） （三）应用与评价 与Ames试验有良好一致性 第一节 基因突变试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 三、其他基因突变试验 （一）营养缺陷型菌株回复突变 （二）细菌的正向突变试验 突变位点更多 （三）粗糙脉胞菌的正向突变试验 白色菌落（野生型）；紫色菌落（突变体） （四）构巢曲霉的突变试验 菌落形态或营养要求：蛋氨酸和2-巯基黄嘌呤 第一节 基因突变试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 一、SOS显色试验 （一）原理：致突变因素诱导细菌SOS修复系统的反应 （二）方法： 检测溶源性大肠杆菌SOS修复的间接最终表现 检测细菌细胞原发直接的SOS反应 （三）应用与评价 准确性与Ames试验相当，比Ames试验简单、快速 第二节 DNA损伤修复试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 二、聚合酶缺陷型菌株试验 （一）原理：比较具有修复能力的菌株与没有修复能力的变异株 （二）方法： 点试法 （三）应用与评价 间接作用；准确性待提高 第二节 DNA损伤修复试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 三、重组缺陷型菌株试验 （一）原理：微生物DNA修复能力的检测（重组修复） （二）方法： 点试法 （三）应用与评价 间接作用；准确性待提高 第二节 DNA损伤修复试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 四、溶源性细菌试验（原噬菌体诱导试验） （一）原理：微生物DNA修复能力的检测（重组修复） （二）方法： 点试法（诱导原噬菌体，裂解指示菌） 第二节 DNA损伤修复试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 酿酒酵母的自发基因重组 第三节 DNA重组试验 第18章 污染物致突变性的微生物检测 大多数致癌物质（并非全部）都具有致突变作用，大多数非致癌物质不具有致突变作用。 第四节 微生物致突变试验与致癌物的确定 第四篇 微生物监测环境 第19章 微生物监测技术的新发展 分子生物学在环境微生物监测中的应用 微生物传感器在环境监测中的应用 第19章 微生物监测技术的新发展 第一节 分子生物学在环境微生物监测中的应用 一、分子生物学技术与环境微生物的分类、鉴定、监测 （一）PCR反应（多聚酶链式反应） Kary B. Mullis 引物 引物 Mullis的构思 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定DNA片段 PCR的基本原理 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） PCR的基本原理 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 PCR的环境微生物检测 细菌检测 毒素检测