联会复合体蛋白ZYP1在拟南芥和白菜同源多倍体减数分裂期的分子细胞学研究-生物工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 本研究由 NSFC-河南省人才培养联合基金 (No. U1204308)和河南省教育厅高等学 校重点科研项目(No. 13A180437) 提供资助 This work was supported by the NSFC-Henan joint Program for Talents（U1204308）and the Education Department of Henan Province, P. R. China (13A180437) 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 多倍体植物减数分裂的稳定进行，需要保证能调控多于两套以上同源染色 体的正常配对和联会，但这个调控机制并不清楚。由于联会复合体 ZYP1 与各同 源染色体之间进行的联会配对有关。因此本研究分析了联会复合体蛋白 ZYP1 在二倍体、同源四倍体拟南芥及白菜减数分裂期的分子细胞学特征。 本研究对比观察二倍体及同源四倍体白菜减数分裂过程，为探究多倍体中 联会配对的调控机制提供一些基础认识；进行免疫荧光染色，利用减数分裂前 期 I 荧光标记蛋白抗体 ZYP1 追踪同源染色体联会配对过程中的动态变化，并对 二倍体、同源四倍体拟南芥及白菜中的荧光信号进行比较；通过荧光定量 PCR 对二倍体、同源四倍体拟南芥及白菜中 ZYP1 基因表达水平进行定量分析；提取 二倍体和同源四倍体白菜花序中的全蛋白，通过 Western blot 对二倍体和同源四 倍体白菜中 ZYP1 蛋白表达量进行分析。研究结果表明： 1．通过 PCR 进行 ZYP1 目的片段的扩增并构建重组载体，1.0mmol/l 的 IPTG 在 37℃条件下诱导融合蛋白在大肠杆菌中高效表达。所制备的多克隆抗体具有 较高的特异性和灵敏性，为后期研究工作提供了保障。 2. 同源四倍体与二倍体白菜减数分裂时期，染色体行为基本一致，减数分 裂后期、末期均无异常，能产生正常的配子。另外同源四倍体由于染色体加倍， 减Ⅰ前期簇拥在一起的染色体较多，染色体间的着丝粒也较多，即联会配对频 率较高。 3. 在二倍体、同源四倍体拟南芥及白菜中，ZYP1 蛋白抗体荧光信号变化趋 势基本一致。该信号出现于细线期，不断增多在偶线期，粗线期时趋于成熟且 信号最多，双线期时却又开始减少，直到终变期的时候消失不见。此外，与二 倍体相比，同源四倍体拟南芥及白菜中的减数分裂期 ZYP1 荧光信号有所增多。 同时，Real-time PCR 分析结果表明，在同源多倍体拟南芥和白菜中，ZYP1 基因 表达水平也显著提高。Western blot 的分析结果表明，同源四倍体白菜中 ZYP1 蛋白的表达量也相应的提高一些。因此，与二倍体相比，同源多倍体很可能通 过调控横向细丝蛋白 ZYP1 的表达水平来促进多倍体减数分裂时期同源染色体 的精准联会配对，进而保证减数分裂过程的正常进行。 关键词：减数分裂；联会复合体；ZYP1；同源四倍体；拟南芥；白菜 I ABSTRACT ABSTRACT Abstract Maintenance of stable meiosis in polyploids is obligatory for controlled pairing and synapsis of more than two sets of homologous chromosomes, but such mechsnism remains under debate. Since the transverse filament protein ZYP1 is a critical component participating in synapsis of homologous chromosome and a timely proph