线粒体超活染色.pptVIP

实验八、 线粒体的超活染色与观察 『目的要求』 1、掌握细胞器超活染色的原理 2、掌握细胞器超活染色的技术方法 3、熟悉线粒体形态、大小 『实验用品』 光学显微镜、盖玻片、吸管、1/5000Janus green B染液、Ringer溶液、洋葱 『实验原理』 超活染色或称体外活体染色是指使已离体的或刚被杀死的生物体内的活细胞保持生活状态，再用活体染料进行染色的一种方法。詹纳斯绿B(Janus green B)可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使詹纳斯绿B染料始终保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中詹纳斯绿B被还原成无色的化合物。 『实验内容和方法』 1、撕下一小块洋葱鳞片的内表面，放在载玻片上的染料中，并使其展开，染10—15 min。 2、用吸管吸去染液， 用Ringer溶液将染液洗去（Janus green B中有蓝色颗粒状物质有碍观察）。 3、加盖玻片。 4、先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，可见洋葱表皮细胞被一大液泡占据，此时，要注意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒，此即线粒体。（线粒体大小直径一般为0.5-1.0μm，长1.5-3.0μm ，细胞核约7μm） 5、实验绘图 *