黑米中花青素的抗氧化性质研究.doc

黑米中花青素的抗氧化性质研究 摘要：将粗提出的黑米花青素分别采用Fenton反应体系、邻苯三酚自氧化体系、普鲁士蓝法来测定其对OH·和O2－·的清除作用及其还原能力进行评价，并以维生素C和异抗坏血酸钠作为实验对照。得出黑米花青素是一种潜在的具有抗氧化活性的天然药物。 关键词：黑米；花青素；自由基；抗氧化性； 前言 　　千百年来，亿万中国人民通过自身实践总结出一句俗语“逢黑必补”。祖国中医理论认为，黑色归肾，肾为先天之本，乃生命之源。据《神农本草经》和《本草纲目》记载，黑米具有滋阴补肾、健脾暖肝、明目活血的功效，又有“补血米”、“长寿米”、“神仙米”的美称。黑米含有丰富的蛋白质、人体所必需的氨基酸、不饱和脂肪酸、维生素C及钙、铁、锌等矿物营养元素，还含有药用价值很高的黑米花青素［１］。近20年来，陆续有研究者开展了黑米的功能评价研究，徐飞［2］、黄玉等［3］先后证实了黑糯米具有防治缺铁性贫血，提高耐缺氧能力和保护白细胞等作用；顾德法［4］证实黑米具有抗应激反应和免疫调节作用。 　　花青素为黑米中的主要黄酮类物质(anthocyanidin)，这是一种广泛存在于自然界植物中的水溶性天然色素，在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。花青素作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆品、医药、保健等方面有着巨大的应用潜力［５］。20世纪80年代人们逐渐认识到清除自由基和抗氧化是营养保健的重要前提和基础，而花青素作为清除自由基能力最强的、其他抗氧化剂所无可比拟的抗氧化剂。大量研究表明，花青素具有很强的抗氧化作用，有助于清除体内的自由基、降低氧化酶的活性、抗衰老、抑制胆固醇吸收、降低低密度脂蛋白胆固醇含量、预防癌症、增强血管弹性、保护胃粘膜、防止心血管疾病等多种生理功能［６］。 在黑米抗氧化功能评价方面：孙玲和张名位等［７］证实黑米水提液和60%醇提液对氧自由基都具有不同的清除效果，且在所用的浓度范围内清除率与供试液的浓度呈明显的量效关系，相关系数达显著或极显著水平，提示黑米具有较强的抗氧化性。陈文等［８－９］应用黑粘米酶解液进行小鼠灌胃试验，表明黑米具有抗氧化作用。因而研究和开发利用黑米花青素有着良好的前景。 异VC钠和VC是食品加工过程中常用的两种抗氧化剂。本实验对黑米中花青素与异VC钠和VC的抗氧化性进行了比较，结果显示，黑米花青素具有较强的抗氧化性能。 1　材料 1.1　供试材料 实验室粗提的黑米花青素 1.2　主要仪器设备 　　紫外-可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、电炉、石棉网、容量瓶、三角瓶、烧杯、试管、量筒、玻璃棒、移液管等。 1.3　主要试剂 　　VC、异VC钠、蒸馏水、邻菲罗啉、硫酸亚铁、双氧水、Tris、邻苯三酚、盐酸、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、甲醇等。 2　方法 2.1　黑米花青素对OH·清除率的测定 　　利用H2O2／Fe2＋通过Fenton反应［１０］产生OH·，邻二氮菲一Fe2＋溶液被OH·氧化成邻二氮菲一Fe3＋。邻二氮菲一Fe2＋(橙红色)的褪色程度可用来衡量OH·的清除量［１１］。取2.0ml磷酸缓冲液、1.5ml浓度为5.0mmol/L邻二氮菲、1.0ml浓度为7.5mmol/L的FeSO4和5.5ml蒸馏水放入试管中，加上述各组样品摇匀后置于恒温水槽中，37℃保温60min，置于波长510nm处测吸光值为A未损。按上述方法，以1ml体积分数为0.001的H2O2代替1ml蒸馏水，测出的吸光值为A损伤；以1ml样品液和1mlH2O2代替2ml蒸馏水，测出的吸光值为As［１２］。按下式计算羟自由基清除率： OH·清除率(％)=［(As－A损伤)/(A未损－A损伤)］×100［１３］ 　　为表示几种抗氧化剂清除OH·能力，采用IC50值表示。将黑米花青素、异VC钠和VC配制成系列溶液，测定提取液浓度与OH·清除率，并绘制OH·清除率对提取液浓度曲线，用方程式计算出OH·清除率为50％时所需提取液浓度(IC50)。IC50值越低，抗氧化剂的OH·清除能力越强，抗氧化性越好。 2.2　黑米花青素对O2－·清除率的测定 　　邻苯三酚在碱性条件下自动氧化，不断释放出O2－·，O2－·又可进一步促进自氧化。中间产物的积累在滞后30～45s与时间呈良好的线性关系，一般维持4min左右，随后减慢。有色产物在320nm有强烈的光吸收。由于自氧化速率依赖于O2－·的浓度，清除O2－·则抑制自氧化反应，阻止中间产物的积累，从而评价受试物清除O2－·的能力［１３］。取25℃预热pH为8.2、浓度为50mmol/L的Tris-HCl缓冲液2.25ml，置于10ml试管中，依次加入不同浓度样品溶液各2ml，接着加入25℃预热过的45mmol/L的邻苯三酚75μl，迅速混