高等植物的遗传转化1.pdf

遗传 HEREDITAS:(Beijing)11(4)：39-421989 综 述 高等植物的遗传转化1) 刘春明 许智宏 （山东师范大学生物系，济南） （中国科学院上海植生所） 自1944年Avery首次阐明肺炎双球菌的遗传转 因2编码生长素叫噪乙酸合成途径的两个酶，基因4 化机理后，人们一直在探索适合高等植物的转化途径， 编码与细胞分裂素合成有关的异戊烯基转移酶，这三 但早期用DNA直接处理种子或细胞均未取得成功。，。 个基因协同作用的结果决定肿瘤特征及在无激素培养 197；年，VanLarebekeEs，等在根癌农杆菌中发现一 基上生长的能力Lr,2s]。基因3编码与章鱼碱和胭脂碱 种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒，即Ti质粒 ‘ 合成有关的酶。不同类型的根癌农杆菌T-DNA的大 1977年ChiltonL，等用限制性内切酶谱法证明，在植 小不同，胭脂碱型农杆菌的T-DNA为一连续片段，约 物的冠廖瘤组织中存在农杆菌Ti质粒的一个片段，称 23-24kb;章鱼碱型农杆菌的 T-DNA为靠近但不 为转移DNA(T-DNA),T-DNA在植物基因组中的 连续的两部分，长度分别为 13k6和 8kb左右。T- 整合和表达导致肿瘤的发生。此后以Ti质粒为基础 DN人编码的所有酶均同转移过程无关，影响基因转移 的植物遗传转化研究获得迅速发展，在理论和应用方 的顺序主要有以下几个： 面均取得很大成就“，‘。本文主姿对植物转化的机理 (1）边界序列：T-DNA的两端边界处各有一个 和方法进行综述。 25bp的正向重复边界序列，该序列是唯一以顺式影响 T,pNA转移的序列。右边界要比左边界活跃得多。 一、农杆菌参与的植物遗传转化 对于一个缺失右边界附近3k6DNA的非致病突变 迄今为止应用于植物遗传转化的农杆菌主要有两 体，插入一个25bp的边界序列就足以恢复其转化活 个种：根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumelociens）和发 性，而且其作用是有方向性的，如将边界序列的方向颠 根农杆菌 (A.rhixogenes),属根瘤菌科，具鞭毛，为杆 倒，转化活性则明显降低 “”。此外，在左边界和右边 状草兰氏阴性菌。根癌农杆菌感染双子叶植物时，可 界的右侧，还各有一个转化驱动子 (o（verdrive)，也是 在被感染的伤口附近形成冠瘦瘤(Crowngall),冠m T-DNA高效率转移不可缺少的。，，。 瘤有两种形态，一是无组织的肿瘤，在无激素培养基上 (2)Vir区：位于 Ti质粒 T-DNA区的左侧，长 可无限生长但不分化；二是畸胎瘤，可分化形成畸形 度为一35k6左右a,虽然该区基因与维持肿瘤性状无关， 芽，在无激素培养基上不断增殖，但无顶端优势且难以 也不整合到植物染色体上，却是 T-DNA转移过程必 生根，与冠瘦瘤诱导有关的质粒为Ti质粒。发根农杆 不可少的。，已经鉴定出来的 Vir区位点有六个，分肘 菌感染植物时可使植物在感染部位产生众 多 的发状 为 VirA.VirB}VirC}VirD,Vir$,VirG，每个位 根。与此有关的是Ri质粒L33。由于所用菌株不同，转 点为一个独立的操纵子，但有的有多个读码框。VirA 化细胞系可特异性地合成不同类型的氨基酸或塘的含 为组成型表达，VirB}VirC,VirD,Vir$的表达受 氮衍生物，称之为冠癣碱 (Opine)。现已发现的冠瘦 植物细胞释放的一些小分子水溶性化合物的诱导， 碱有十五种以上，包括章鱼碱 (Octopine),胭脂碱 VirG具较高水平的基础表达 (Foundationalexpre- (Nopaline）和农杆碱 (Agropine）等，是农杆菌赖以 ssion)，同时也受植物的诱导。现已发现同激活Vir 生存的碳源和氮源。 区基因表达有关的信号分子有九种，均为酚类化合物。 1，农杆菌 T-DN▲转移机理