湖南石菖蒲水提液部位HPLC特征指纹图谱研究.docVIP

湖南石菖蒲水提液部位HPLC特征指纹图谱研究 赵曦1周晓东2 (1吉林大学珠海学院519041; 2珠海市食品药品监督管理局519000) 【摘要】目的建立湖南石菖蒲水提液部位HPLC分析色谱条件，建立水提液部位 标准指纹图谱。方法 色谱条件:Waters Cosmosil C18色谱柱(4.6mmtimes;250mm, 5mu;m)；流动相:甲醇：3%三乙胺(磷酸调PH到4.0)=56:44；检测波长:245nm； 柱温：28°C；流速：l.Oml/min；进样量:15mu;L结果标定共有指纹峰6个， 峰型较好，峰面积稳定，相似度均在0.90以上，与其他成分分离较好。结论方法 准确性可靠，重现性好，可用于石菖蒲药材水提液部位的指纹图谱研究。 【关键词】石菖蒲水提液指纹图谱HPLC 【中图分类号1R282.71【文献标识码】A【文章编号12095-1752(2012)15-0023-03 石菖蒲来源于天南星科Araceae菖蒲属Acorus植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott的干燥根茎，根茎中主要含有挥发油，故多重视其挥发油成分的 研究。但根据近年来有关石菖蒲水提液部位现代药理研究的报道，其开窍豁痰、 醒神益智、化湿和胃的功效并不局限于挥发油部位。有研究表明石菖蒲水提液对 抗抑郁⑴、抗癫痫⑵及小鼠吗啡依赖戒断⑶具有一定疗效。木文所用石菖蒲来 源于湖南，采用水蒸气蒸憾法，去除挥发油得到水提液部位，二极管阵列对最佳 检测波长进行筛选，确定相关色谱条件，建立湖南石菖蒲水提液部位特征指纹图 谱，报道如下。 一材料 样品来源 样品收自湖南邵东县药农，产自附近丘陵，海拔约200米，分为个子货 及饮片，带少量泥土，完整者根茎分叉，数量2?5个不等；表皮红棕色，粗糙， 节1.5?3cm；断面微红色，内皮层环纹明显，可见维管束小点及棕色油点；气 芳香，香气浓。经珠海市药监局主任药师、广州中医药大学客座教授周晓东鉴定 为天南星科植物石菖蒲的干燥根茎。采收时间及规格见表1: 表110批湖南石菖蒲药材采收时间及规格 仪器与药品 美国Agilent 1200 series二极管阵列检测器；日本岛津LC-2010A高效液 相相色谱仪；甲醇：色谱纯，购于天津四友生物医学技术有限公司；三乙胺：分 析纯，购于广州化学试剂厂；磷酸：分析纯，购于广州化学试剂厂；正丁醇：分 析纯，购于广州化学试剂厂；水：超纯水。 二方法 色谱条件 Waters Cosmosil C18 柱(4.6mmtimes;250mm, 5mu;m)；流动相：甲 醇：3%三乙胺(磷酸调PH到4.0) =56:44；检测波长：245nm；柱温：28°C；流 速：l.Oml/min；进样量：15mu;l；扌旨纹图谱釆集时间60mino 供试品溶液的制备， 取药材5g,粉碎成1?2cm的粗粒，加20倍量的水，水蒸气蒸憾法提 取挥发油10小吋，弃去挥发油，收集水提液部分，滤过，滤液减压浓缩至1?10? 1.15(50°C),用等量水饱和正丁醇提取4次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇， 残留物真空干燥(-6.86Kpa, 70°C),用水溶解，定容到10ml量瓶中，0.45mu;m 微孔滤膜过滤，进样15mu;L 方法学考察 为了考察分析方法的可靠性，选取编号2、3、4的样品，分别对其仪器 精密度、稳定性和实验方法重复性作了相应考察。 精密度试验 取供试品溶液，连续进样6次，相似度值均为1.000,各共有峰的相对 保留时间和相对保留峰面积的相对标准偏差(RSD)小于3%,结果表明仪器精密 度良好。 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配制后Oh、12h、24h、48h进样，相似度值均 在0.990?1.000之间，各共有峰的相对保留吋间和相对保留峰面积的相对标准偏 差(RSD)小于3%,结果表明供试品溶液在室温下放置48h稳定。 重现性试验 将同一药材样品按2.2项下依法制成5份进样，相似度值均为1.000, 各共有峰的相对保留吋间和相对保留峰面积的相对标准偏差(RSD)小于3%,结 果表明重现性良好。 三HPLC指纹图谱的建立 参照物的选择 取批号石菖蒲药材，按2.2项下配制供试品溶液，在上 述色谱条件下，进样分析，得到HPLC指纹图谱，见图1。由图可见保留时间为 20.2min的色谱峰，峰高最高，峰型较好，峰面积稳定，与其他成分分离较好， 因此本研究选择该峰作为参照物(S)o 图1湖南石菖蒲水提液部位参照物图谱 对照谱图的生成及共有指纹峰的标定 取批09032810的10批湖南石菖蒲药材，按2.2项下配制 供试品溶液，按上述考察的色谱条件进行分析，得到HPLC指纹图谱，见图2。 将图谱导出，用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》生