原料预处理技术.ppt

Company Logo 过滤的阻力来自于过滤介质和滤饼。通常，Rm是常量，Rc随着过滤时间的推移，逐渐增大。 滤饼阻力与滤饼干基质量m的关系为 式中，Rc —滤饼阻力，m-1 m —滤饼干重，kg α —滤饼的平均比阻，m/kg A —过滤断面积，m2 Company Logo 不可压缩滤饼， α是常数；可压缩滤饼的α是压力差的函数： α=k ·Δp m 生物过程中，可压缩滤饼最常见。 可压缩滤饼的比阻随压力差提高而增大，因此，过滤操作中，压力差是最重要的操作参数，对可压缩滤饼，一定要缓慢增大操作压力。 Company Logo 过滤时，按照外加压力和流速的变化，可将过滤操作分为： ①恒压过滤—用压缩空气或真空作为推动力； ②恒速过滤—用定容泵来输送料液； ③变速—变压过滤—用离心泵来实现。 由于滤饼是影响过滤速度的主要因素，因此在过滤操作前，要对滤液进行絮凝等预处理，降低滤饼的阻力。 Company Logo 4.过滤设备 生物分离常用的过滤设备主要有：加压叶滤机、板框过滤机、回转真空过滤机等。 板框过滤机使用最为 普遍。 Company Logo (1) 板框压滤机 板框压滤机最为常用，由滤板和滤框组成，两者间衬以滤布(过滤介质)。滤板起到支撑滤布和分布悬浮液的作用，滤框则起到存放滤饼的作用。 这里过滤机可以得到含水量较低的滤饼，但当产生有毒气体或生物危险物存在的场合，不宜使用。 其他三种过滤机则都是封闭式的，可用于存在有毒烟雾或生物危险物的场合。 Company Logo (2) 水平板式过滤机 适用于小规模分离操作，滤片的清洗和过滤介质的安装必须放在机外进行。 (3) 垂直叶滤机 具有较大的比过滤面积。 (4) 管状过滤机 管状垂直过滤机内过滤罐系悬挂在管板上，滤饼在管子外表面形成，滤液流动通过沉积在管上的滤饼进入顶盖并排出，管子可用反冲法清洗。 Company Logo (5) 回转真空过滤机 教材p24 Company Logo 三、包含体的分离和蛋白质复性 包含体：是很多利用大肠杆菌为宿主细胞的外源基因表达产物，在细胞内凝聚成没有生物活性的不溶于水的固体颗粒。 包含体主要由蛋白质构成，它的一级结构是正确的，但立体结构是错误的，所以没有生物活性。 Company Logo 1.包含体的形成与分离 包含体的形成有以下几种可能性： ⑴少量蛋白质产生时是可溶的，其后积聚的量过多，在细胞内超过其溶解度而沉淀，并随诱导时间延长，不溶部分增加，但细胞裂解，并用适当溶剂稀释后，可转为溶解状态。 ⑵蛋白质合成太快，肽链来不及形成正常的折叠构象，导致分子间疏水基相互作用聚合而不溶，此时即使稀释也不能溶解，生物活性受到影响。 Company Logo ⑶高表达的蛋白质没有形成分子内正常的二硫键连接，这可能是由于肽键来不及形成正常的折叠构象而导致错误的二硫键连接，或是高表达时细胞内氧化还原等条件不同而生成不同的二硫键连接。 ⑷蛋白质的溶解需要与其他成分结合或经其他成分诱导形成适当的和可溶性的构象，当产生的蛋白质量过多，所需其他成分相对不足，蛋白质就不能溶解。 Company Logo ⑸包含体的形成亦与蛋白质自身稳定性有关。 因此，工程菌株产生的重组蛋白质的回收应包括以下步骤： ①包含体的分离； ②用变性剂溶解包含体中的蛋白质； ③变性蛋白质的复性和重新氧化(包括除去过剩的变性剂和还原剂)； ④以一般纯化技术，获取成品蛋白质。 Company Logo 2.包含体的溶解 包含体常用变性尿素或盐酸胍，以及去污剂SDS(十二烷基磺酸钠)来溶解，它们可分别破坏蛋白质的高级结构及肽链之间的疏水作用，从而使蛋白质肽链相互分离。 溶解包含体的变性剂主要用6-8mol/L的盐酸胍或脲。 Company Logo 习题 1.简述破碎方法的选择依据。 目的产物在细胞质中，需机械破碎法 目的产物在细胞膜附近，可采用非机械破碎法 目的产物与细胞膜或细胞壁结合，可采用两种方法结合 Company Logo 2.凝聚和絮凝有哪些不同之处？ 原理不同：凝聚是在投加的化学物质(如：水解的凝聚剂，铝、铁的盐类或石灰等)作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1mm大小的块状凝聚体的过程。絮凝是使用絮凝剂(通常是天然或合成的大分子质量聚电解质)将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团。 凝聚剂与絮凝剂的作用不同：凝聚剂是对粒子表面电荷的中和；消除双电荷层而脱稳；或者通过氢键或其他复杂的形式与粒子结合发