miRNA讲稿徐和学生用.pptVIP

前景 siRNA药物出来后，对原来专一性反义抑制靶基因的反义药物（例如抑制Bcl2基因的G3139）研究认为没有放大效应，抑制效果有限。认为siRNA药物的靶向性也好，不会出现脱靶效应，并且有放大效应，比反义药物作用敏感。但是同miRNA药物比较，miRNA的结合能力变化大，1个miRNA可以抑制多个甚至几十个mRNA的功能，因此认为miRNA靶点药物的特点是1个靶点可能将该类疾病的相关因子一网打尽，因此可能比siRNA药物具有更高的有效性。 同Bcl2相关的目前进行比较多的研究是过表达miR-181,145,15a,15b,16,34,或用反义抑制21 肿瘤耐药性 胃癌细胞系SGC7901和长春新碱耐药细胞比较，后者24个miRNAs下调2倍以上，11个miRNAs 上调2倍以上。Q-RTPCR进一步证明miR-181s下调4倍。耐药可能通过miRNAs水平改变调节引起，CDDP引起卵巢癌细胞的let-7e,miR-30c,miR-25b,miR130a,miR335的不同表达水平变化，认为这6个可能相关于耐药。 肿瘤耐药性 胃癌细胞系SGC7901和长春新碱耐药细胞比较，后者MDR表达增加，miR-181b下调，Bcl2表达增加。高表达miR-181b使MDR表达增加下降，Bcl2蛋白水平下降，miR-181b的Q-RTPCR表达增加，对化疗药物敏感性增加和凋亡敏感性。 ? 耐药可能通过miRNAs水平调节改变，CDDP引起的卵巢癌细胞let-7e,miR-30c,miR125b,miR-130a,miR335等不同表达水平变化，认为这6个miRNAs同耐药直接相关。实际可能有相当多的miRNAs参加化疗耐药的影响，调节部分miRNAs可能增加化疗耐药的敏感性。 cardiac fibroblasts directly to cardiomyocytesCirculation Research published online April 26, 2012 心肌成纤维细胞-心肌细胞 在实验室器皿中首次将实验鼠心脏病发作后留下的疤痕组织变成心肌细胞。最新研究一旦在人类身上试验成功，将有助于科学家们研发出新的心脏衰竭疗法。 研究小组成功利用诱导性多能干细胞（iPS细胞）人工制成癌干细胞并在小鼠身上得到验证 日本京都大学研究小组将Oct3/4,Sox2,c-myc,klf4通过逆转录病毒载体转入小鼠的成纤维细胞，把成纤维细胞变成类似胚胎干细胞的多能干细胞，并将其命名为iPS. 研究一般方法 miRNA表达低，转染过表达方法： （1）??? 载体方法，慢病毒方法 （2）miRNA mimics模拟物，① 成熟sense，Antisense 为两条合成，不完全配对，文献miR-181b，②成熟sense连模拟物为一条链，单链，可以委托合成，有现成库，③成熟sense，Antisense在/找到，成熟sense就为红色区，Antisense则在后面2个不配对区改成配对，并且链用3’-benzen-pyridine(BP)修饰。已进行动物实验（文献miR143） 抑制相关基因表达 siRNA与miRNA药物不同 1、根据mRNA序列，写出siRNA,aiRNA序列及可能的修饰方式：GUGGGACUUUGGAAAUACA 2 miR-181b序列是: 5’-AACAUUCAUUGCUGUCGGUGGGU -3’，设计出反义药物序列和miRNA药物可能的序列和修饰方式 结论 miRNAs的发现无疑是对现有真核生物基因表达调控的补充，其在基因调控及生物发育中的作用正在被不断研究并开发。miRNAs在体内不仅作为功能分子发挥作用，还参与并决定基因表达调控、蛋白质翻译，从而影响细胞代谢等所有生命进程。 结论 由miRNA介导的RNA干扰技术正迅速从基础研究领域迈进临床应用，相信不久的将来将有越来越多的RNA干扰药物进入临床研究和应用。 循环miRNAs作为一种无创性检测手段在疾病的早期诊断和预后中也展示出广阔的应用前景。相信不久的将来将有越来越多的临床检测得到应用。 基础研究方面的基因调控网络的论文将越来越多。 结论 虽然miRNAs在疾病发生发展过程中的作用是“因”还是“果”仍需更多研究来证明，但可以认为对miRNAs的深入研究推动了从RNA、DNA和蛋白质三大生物分子方面对疾病进行预测、诊断和治疗的进程。 结论 但是siRNA、miRNA的RNAi技术真正能应用于日常生活虽然为时尚早，还需要科学家们进一步广泛深入细致持久的研究。 尽管如此，我们依然可以预测，与其它基因技术一样， siRNA 、miRNA的RNAi技术将在不久的将来会在基因治疗和基因应用中发挥极大的作用，并将给整个生物理论带来巨大而深远的影响 新型长非编码RNA