宝诚实时荧光定量PCR培训.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 运行时间的比较 快速升降温,缩短了运行时间 其他快速PCR 仪器，需要特殊的试剂和耗材，优化的条件，才能实现快速PCR的功能 5oC/sec max ramp rate Accuracy: +/- 0.2oC, 10 sec Uniformity: +/- 0.4oC, 10 sec 6oC/sec max ramp rate Accuracy: +/- 0.2oC, Uniformity: +/- 0.4oC, ?? sec 温度梯度功能 合适的退火温度，对于PCR的特异性和扩增效率非常重要，特别是对于计算实时荧光PCR结果的精确定量 温度梯度功能只要运行一次实验，就能找到最合适的退火温度条件 温度梯度 温差范围 24°C 从后往前逐渐递减（最后排温度最高） 温度梯度范围 30-100°C “动态变温” – 所有的反应孔在同一个时刻到达设定的目标温度，保持相同的孵育时间 步进马达控制光梭的移动 先进的控制技术，减少移动部件的磨损，操作更稳定 专利的精确定位技术，误差控制在3um之内， 精确控制光梭的温度，确保均一的激发和检测 先进的光梭移动技术 多种扫描模式 全通道扫描模式 每个通道，每个样品采集200个数据点 对最后100 数据点进行均一化处理 每个数据点的时间为2毫秒 快速扫描模式（FAM/SYBR Green） 每个样品采集80个数据点 对最后50 数据点进行均一化处理 每个数据点的时间为1.1毫秒 LED LED 的原理 LED是light-emitting diode的缩写，在某些半导体材料的PN结中，注入的少数载流子与多数载流子复合时会把多余的能量以光的形式释放出来，从而把电能直接转换为光能。PN结加反向电压，少数载流子难以注入，故不发光。这种利用注入式电致发光原理制作的二极管叫发光二极管，通称LED。 LED的寿命有多长？ 20,000-30,000 小时 ~5,000 次实验（熔点曲线） ~40,000 次实验（无熔点曲线） 数据采集模式 Mode Channel(s) Scan Time (sec) All Channels 1-5 12 SYBR/FAM Only 1 3 FRET 6 3 三种数据采集模式 SYBR/FAM 快速扫描模式，快速得到实验结果 全自动热盖 通过软件或仪器上的按钮自动打开和关闭热盖 弹簧辅助的直流马达控制，类似于汽车的电动车窗 自动感受样品管，防止样品的蒸发，确保结果的均一性 开关20,000次，无需维护 可以使用任意的反应管 按照软件的实验设置指南和多种数据分析工具，快速得到实验结果 和Windows XP 或Vista 兼容 内置的维护工具 扩展实验检测通量 同时运行 4台 CFX96 同时运行1台 CFX96和其他3台1000系列的PCR仪（C1000或S1000） 新一代软件 CFX Manager 软件的特点 实验开始向导方便开始实验 无需设置反应板，可以在运行前、运行中或运行后设置反应板，输入样品信息 “Express load”功能，快速找到反应板设置文件和实验程序文件 实验运行结束后，实验结果将作为附件发送到电子邮箱，可以随时随地分析实验数据 反应孔分群功能，能够同时分析多次实验的数据 可以根据需要选择图形或表格输出 内置的基因表达功能，有多种基因分析模式，如多参照基因分析 ， 根据每个基因的扩增效率分析 CFX Manager 软件 关于软件 安全版软件 Demo版软件 以后可以控制MiniOpticon 可以分析： OM3.1 .tad (Chromo4, Opticon 2, MiniOpticon) .opd (iQ5 ， MyiQ) 内置的维护和支持工具 10??l 反应体系的均一性结果 Fast Scan All Channels Ave Ct = 19.29 ± 0.12 Max-Min =0.58 Ave Ct = 19.81 ± 0.12 Max-Min =0.53 Ave Ct = 19.67 ± 0.11 Max-Min =0.52 Ave Ct = 19.21 ± 0.11 Max-Min =0.61 Hex Texas Red 10??l 反应体系的均一性结果 Ave Ct = 19.96 ± 0.12 Max-Min =0.62 Ave Ct = 19.27 ± 0.07 Max-Min =0.37 Cy5 Quasar 705 10??l 反应体系的均一性结果 精确区分目的基因 2-fold discrimination of IL-1? target detected from human genomic