报告：纸电泳和醋酸纤维.pptVIP

7 、染色后区带清晰度不良 陈旧标本可使区带分离清晰度大为降低。应尽量当日标本当日做，最多不超过2天。另外标本不可溶血，因溶血标本中血红蛋白与β球蛋白的电泳区带相重迭。可造成β球蛋白含量升高而蛋白质含量相对减少的结果。 8 、白蛋白区带染色不均并有空泡 这是染色液陈旧所致，染色液存放和使用过久，会降低蛋白质结合染料的能力。发现正在使用的染液已陈旧时，应立即全部弃去，更换新液。 9、 透明时膜发白不能完全透明 薄膜未干或透明液中醋酸含量不足可造成膜发白而不能达到透明的目的，应将薄膜晾干，适当增加透明液的醋酸浓度。 10 、透明时膜溶解 室内温度过高或透明液醋酸浓度过高均可使膜溶解。可采用适当降低透明液醋酸浓度的办法来解决。 五、注意事项 1、醋酸纤维素薄膜一定要充分浸透后才能点样。 2、点样后电泳槽一定要密闭。电流不宜过大，以 防止薄膜干燥，电泳图谱出现条痕。 3、缓冲溶液离子强度不应小于0.05或大于0.07。因为过小可使区带拖尾，过大则使区带过于紧密。 4、电泳槽中缓冲液要保持清洁(数天过滤)两极溶液要交替使用；最好将连接正、负极的线路调换使用。 5、通电过程中，不准取出或放入薄膜。通电完毕后，应先断开电源后再取薄膜，以免触电。 (一)、纸电泳的原理、操作及其应用 (二)、醋酸纤维薄膜电泳： 原理 特点 应用：血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 电泳图谱 异常及其原因 注意事项 纸电泳和醋酸纤维素薄膜电泳 制作小组成员：（9~16号） 李敏、周瑞、肖阳、王超、陆瑶、谭茹瑜、刘倩、刘忠志 纸电泳 纸电泳是根据电泳现象在渗透了缓冲液的滤纸加上电场使物质移动的电泳法。（也就是把样品以带状加在作为支持体的滤纸内来检测其移动和分离的方法。） 常用以分离性质相似的物质，如各种氨基酸的分离和稀土元素的分离等。 纸电泳原理 纸电泳是利用纸作为支持物，使带电微粒在纸上电泳，从而达到分离的一种方法。 将样品点在用缓冲液浸湿的滤纸上，将滤纸放在电泳槽的支架上，滤纸的两端浸在缓冲溶液里，接通电源，纸的两端就有一定的电压，吸引带电颗粒在纸上移动。 氨基酸在其等电点时以兼性离子存在，若溶液的pH低于氨基酸的等电点（pH﹤pI），则氨基酸分子带有正电荷（Aa+），电泳时向负极移动；若溶液的pH高于等电点（pH﹥pI），氨基酸分子带有负电荷（Aa-）,电泳时向正极移动。电泳过程中，由于电极反应会使连接正极和负极的电解液的pH向相反方向变化，所以应用缓冲溶液以保持pH相对稳定。 另外，选用挥发性的缓冲溶液较好，因为电泳后滤纸烘干时容易除去，以减少对显色的影响。 纸电泳操作要点 1、选择缓冲液对显色剂和紫外光吸收等观察区带的方法无影响 A : 分离蛋白质，pI≈ 5，选pH8.6的缓冲液（巴比妥缓冲液pH8.6、硼酸pH8.6、磷酸pH7.4) B: 分离氨基酸：邻苯二甲酸氢钠、磷酸—醋酸，pH5.9 C:分离核苷酸巴比妥－醋酸pH2.5，柠檬酸pH2~3 D: 分离糖类：HAC-NaAC, pH3~5 2 、滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响 电场强度。 3 、点样 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知 样品）、点一边（已知样品） 干法、湿法 4 、电泳 电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间 5 、显色及分析 蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B Aa：茚三酮、靛红 核酸：紫外光下观察 一般洗脱定量 纸电泳的操作注意事项 1．点样应在滤纸的一端距纸边２－１０cm处。样品可点成圆形或长条形，长条形的分离效果较好。点样量为５－１０微克和５－１０微升。点样方法有干点法和湿点法。 （湿点法是在点样前将滤纸用缓冲液浸湿，样品液要求较浓，不亦多次点样。干点法是在点样后再用缓冲液和喷雾器将滤纸喷湿，点样时可用吹风机吹干后多次点样，因而可以用较稀的样品。 ） 2．严禁空载，空载易造成电泳仪损坏，只有高级双稳（能控制电流强度和电压）电泳仪才提供空载保护。 3．电泳完毕后，应先关闭电源，再拔小插头，以免触电。在仪器接通电源工作期间，严禁接触电泳槽电极、电极插头和电泳物等，严禁输出电极与地短路，以免破坏仪器。仪器不许空载运行，防止震动，使用环境应保持干燥，应无腐蚀性气体存在。 纸电泳的应用 纸电泳的设备简单，应用广泛，是最早使用的一种电泳技术。 最初用于蛋白质，后来也用于氨基酸、核苷酸一些低分子物质，其优点在于或采用滤纸与色素结合的直接电泳图，或剪下滤纸的任何部分来抽提其中的物质。 在早期的生物化学研究中，曾发挥重要作用。由于纸电泳时间长，分辨率较差，近年来逐渐为