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错配修复系统： 酶：错配矫正酶 （mismatch correction enzyme） DNA聚合酶Ⅲ DNA连接酶等11种蛋白 步骤：启始、切除、修复 启始： 根据序列GATC中腺嘌呤（A）的甲基化程 度不同，错配矫正酶的MutS部分识别错配 区域，MutH、MutL识别未甲基化的GATC序 列，将新合成单链切出缺口（nick） 切除： 核酸外切酶将GATC到错配区域间的DNA链 切除。为防止剩下的暴露单链降解，需单 链结合蛋白（SSb）保护 修复：DNA聚合酶Ⅲ合成，连接酶对缺口 进行连接 林氏综合症(Lynch Syndrome) 卵巢癌综合症 2、光修复（photoreactivation） 直接修复 可见光激活光复活酶，消除由于紫外线照射而形成的嘧啶二聚体 （低等生物和鸟类）。 紫外光照射可使相邻的两个T 形成二聚体 光修复酶使二聚体解聚为单体状态，DNA完全恢复正常 光修复酶的激活需300～600μm波长的光。 3、暗修复（dark repair） （1）切除修复：掌握概念和过程 参与的酶：核酸内切酶，polⅠ,DNA连接酶 （2）重组修复：了解概念和过程 重组蛋白RecA，polⅠ，连接酶 损伤保留 （2）DNA聚合酶：核酸外切酶活性 ① 3′→5′外切酶活性 ② 5′→3′外切酶活性 3）DAN聚合酶（DNA polymerase）分类 大肠杆菌DNA聚合酶 I、Ⅱ、Ⅲ DNA聚合酶I：多功能酶 1）沿5’→3’方向延长DNA链（DNA聚合酶活力） 2）由3’端水解DNA链（3’ → 5’核酸外切酶活力） 3）由5’端水解DNA链（5’ → 3’核酸外切酶活力）等 ——常用的工具酶 复制准确性的保证： 复制过程中碱基的配对受到双重核对 1）DNA聚合酶的选择作用 2）3’ → 5’ 外切酶的校正作用。 子链的准确延长 所有DNA聚合酶： 聚合酶活性 3’，5‘外切酶活性 dNTP进入 与前一个核苷酸3’-OH形成磷酸二酯键 水解切除错配碱基 DNA子链准确延长 保证遗传信息稳定传递到下一代 变异，几率非常小，进化速度非常缓慢 DNA聚合酶Ⅱ： 3’ → 5’核酸外切酶活力 DNA聚合酶Ⅲ： 真正起复制作用的酶，对温度敏感（415页） E.Coli的DNA聚合酶 真核细胞中的DNA聚合酶 DNA聚合酶水解引物并填补空隙 4、DNA连接酶：填补缺口、连接冈崎片段 （五）DNA复制的拓扑性质（419） 1、解螺旋酶 领头链 rep蛋白 Dna B 随从链 解链酶Ⅱ 引物酶 RNA聚合酶 Dna G（RNA聚合酶） 引发体 DnaA辨认复制启始点，再结合DnaB, DnaC及其 他复制因子形成复合体 2、DNA拓扑异构酶（解旋酶） 3、引物酶和引发体 DNA复制酶系 （六） DNA 的半不连续复制 日本，冈崎（1968） 1、概念 DNA、RNA：合成方向5‘→3‘ DNA双链沿复制叉移动时，子链合成方向相反 一条链合成方向与复制叉同向，连续复制——前导链 另一条链合成方向与复制叉方向相反，不连续 ——滞后链（随后链） DNA复制，一条链连续，另一条链不连续 前导链、滞后链；冈崎片段 冈崎片段的合成需要引物，“引物合成酶” 冈崎片段：DNA复制过程中出现不连续片段 2、DNA半不连续复制的过程（请看418页） （七） DNA复制的过程（421页） 1、复制的起始： 1）DNA解旋、解链，形成复制叉：拓扑异构酶、解链酶、SSB 2）RNA引物合成： 依赖于单链模板，引物酶催化合成小段RNA引物 特点： 原核：环形DNA，一个起点，双向复制 真核：线形DNA，多个起点，多复制叉 2、复制的延长： 1）子链延长： 引物合成，polⅢ（真核为DNAδ或α）催化 在引物3’-OH末端添加与模板链对应互补的dNTP 2）半不连续合成： （1）领头链：链的延长方向与解链方向相同 连续合成 （2）随从链：链的延长方向与解链方向相反 不连续合成（冈崎片段） 3、复制的终止 1）水解引物及填补空隙： 冈崎片段合成后，polⅠ（真核可能是δ）水解去除RNA 填补留下的空隙 2）连接酶连接冈崎片段形成完整双链DNA： 空隙填补后，DNA片段间缺口由连接酶催化连接 产生完整的双链DNA分子 DNA的复制导致端粒缩短 逆转录：以RNA为模板合成DNA 以病毒RNA为模板，以dNTP为原料，由逆转录酶催化，按碱基配对规律合成DNA的过程