《基因工程》专题复习课件.pptVIP

1、准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶 （限制酶） 2、DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 3、基因转移工具（“分子运输车”） ——运载体 1. 载体的必要条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并复制 ②有一个至多个限制酶切割位点 ③具有某些标记基因 1、从基因文库中获取目的基因 练习：切取某动物合成生长激素的基因，用某种方法将此基因转移到鲇鱼的受精卵中，从而鲇鱼比同类个体大3～4倍，此项研究遵循的原理是 （ ） A．基因突变，DNA→RNA→蛋白质 B．基因工程，DNA→tRNA→蛋白质 C．细胞工程，DNA→RNA→蛋白质 D．基因重组，DNA→RNA→蛋白质 D 蛋白质工程的崛起 一、蛋白质工程的崛起的缘由 基因工程产物 基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。 这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。 二、蛋白质工程的基本原理 1、蛋白质工程的目标 根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计。 2、天然蛋白质的合成过程 DNA（基因） 转录 mRNA 翻译 蛋白质 基因→表达（转录和翻译）→形成氨基酸序列的多肽链→形成具有高级结构的蛋白质→行使生物功能 ３、蛋白质工程的基本途径 预期的蛋白质功能 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） * 基因工程专题复习 一、基因工程的基本操作工具 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 1、来源： 2、作用： 3、结果： 形成两种末端 “分子手术刀” ——限制酶 黏性末端 平末端 G A A T T C G C T T A A A A T T C G 限制酶切割ＤＮＡ分子示意图 C T T A A G 黏性末端 黏性末端 什么叫平末端？ 1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 B “分子缝合针” —ＤＮＡ连接酶 １.作用： 连接磷酸二酯键,而不是氢键。 ２.DNA连接酶的种类 E·coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ 连接部位 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 相同点 双链 单链 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键 都能形成磷酸二酯键 形成单链 DNA分子 形成新的DNA分子 形成重组DNA分子 形成黏性末端或平末端 作用结果 将DNA 两条链之 间的氢键 打开　　 只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 切割目的基因及载体，能专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 作用特点 碱基对间 的氢键 磷酸二 酯键 磷酸二 酯键 磷酸二 酯键 作用部位 DNA 分子 脱氧核苷酸 DNA分子 片段 DNA分子 作用底物 解旋酶 DNA 聚合酶 DNA连 接酶 限制酶 种类 项目　　  “分子运输车” —载体 2.常用的载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒。 二、基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 （一）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因文库种类 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ . ②原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 2.利用PCR