化学发光免疫法检测AFP的空白限-检出限和定量检测限的建立与(精).docVIP

临床检验杂志2010年11月第28卷第6期Chin J Clin Lab Sci ，Nov．2010，Vol．28，No．6 ·469· 764X （2010）06-469-03文章编号：1001- ·质量管理研究· 化学发光免疫法检测AFP 的空白限、检出限和定量检测限的建立与评价* 温冬梅，张秀明，王伟佳，黄福达，何娟，肖礼红，欧阳能良，吴剑杨，李曼，庞嘉琳（中山大学附属中山医院检 验医学中心，广东中山528403） 摘要：目的 建立并评价化学发光免疫法检测甲胎蛋白（AFP ）的空白限（LoB ）、检出限（LoD ）和定量检测限（LoQ ）。方法 参 A 文件，考CLSI EP17-将AFP 空白样品和系列低浓度样品在Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统上进行检测，依据数据LoD 和LoQ ，采用相应的统计学方法，确定血清AFP 的LoB 、同时用传统方法建立AFP 的检测低限（LLD ）、生物检的分布规律， 测限（BLD ）和功能灵敏度（FS ）。结果 A 方案建立的LoB 为0．80ng /ml，LoD 为2．60ng /ml，LoQ 为3．30ng /ml；应用EP17-应用两种方法建立的LoB 和LLD 均低于 BLD 为2．20ng /ml，FS 为2．20ng /ml。结论用常规方法建立的LLD 为1．00ng /ml， Bayer Centaur 240化学发光免疫系统检测AFP 的分析灵敏度得到验证确认；实验室在验证仪仪器说明书声明的灵敏度性能， 器声明的LoB 时，应同时建立检测系统的LoD 和LoQ ，以便为临床提供更为可靠的检验结果。两种评价方案均具有实用性，国内实验室可视具体情况选择不同的评价方案。关键词：甲胎蛋白；方法学评价；分析灵敏度中图分类号：R446 文献标识码：A ［1］ 根据《医疗机构临床实验室管理办法》和医 时取不同浓度的低浓度样品各1支，待溶解混匀后与常规标本同等条件下进行测定。1．5 常规方法 4-5］参照文献［确定AFP 的LLD 、 BLD 和FS 。空白样品作10次批内重复测定，低浓度样品作日间重复测定，共10d ，记录光强度值（RLUs ）。1．6 EP17-A 方法 A 文件［3］确定AFP 参照EP17-LoD 和LoQ 。空白样品进行60次测定，的LoB 、每日1批，每批重复检测12次，共5d ，记录浓度值。6个浓度的低浓度样品作日间重复测定，每日2批，每批共5d ，记录浓度值。相隔时间＞2h ，1．7 统计方法 LLD 、BLD 和FS 的统计方法参照文献空白限（LoB ） 按国际标准化组织（ISO ）的 1．7．1［4-5］。1．7．2 建议，设定Ⅰ类错误和Ⅱ类错误水平均为5%（α=β=5%），若空白值呈正态分布，按下式计算空白限：LoB =μB +1．645σB （式中μB 和σB 分别为空白样品检测值的均值和标准差）。若空白值呈非正态分布，则用非参数方法估计第95百分位数（Pct B ）的N B （ρ/100）+0．5］即：LoB =Pct B 100-α，即：LoB =在［值， 0．95? N B +0．5］位置的结果。位置的结果=在［ 注：式中N B 是重复检测的次数，ρ是百分位数。1．7．3 检出限（LoD ） 若低浓度样品检测结果呈 学实验室认可的要求 ［2］ ，临床实验室必须对检测系 统的主要分析性能进行验证确认或分析评价，证实其能够满足预期的质量要求后才能用于常规检测。分析灵敏度是检测系统的主要性能指标之一，本文参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI ）发布的《检出限和定量检测限的确定方案》，建立化学发光免疫法检测AFP 的空白限（LoB ）、检出限（LoD ）和定量检测限（LoQ ），并与传统方法比较，现报道如下。11．1 材料与方法检测系统 Bayer Centaur 240化学发光免疫 ［4-5］ ［3］ 建立的检测低 限（LLD ）、生物检测限（BLD ）和功能灵敏度（FS ）进行 分析仪及原装试剂、校准品（批号为CD54L 、CD54H ）和质控品（批号为9827301和9827302）。1．21．3 空白样品低浓度样品 用Bayer 原装配套AFP 稀释液作用Bayer 原装配套AFP 稀释液 为空白样品。 对AFP 浓度为5．50ng /ml的新鲜血清作系列稀释，配制成一系列低浓度的AFP 样品，其理论浓度（ng /ml）分别为0（空白）、1．10、1．65、2．20、3．30、4．40、5．50，介于预期检测限浓度1 4倍。1．4 样品保存 将配制好的系列低浓度样品分装 于带盖一次性试管内于－20? 冰箱保存，每次测定 * 基金项目：广东省医学科研基金项目（2009A2009763），中山市科技计划项目（2009