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（二）、保温和沉淀蛋白质 编 号 步 骤 A B C 肝组织糜 （ml） 预先煮沸的肝匀浆 （ml） PH7.6磷酸盐缓冲液 （ml） 正丁醇 （ml） — 2.0 4.0 2.0 2.0 — 4.0 2.0 2.0 — 4.0 2.0 43℃水浴保温40分钟 肌匀浆 （ml） 预先煮沸的肌肉匀浆 （ml） — 4.0 — 4.0 4.0 — 43℃水浴保温1小时 20%三氯醋酸 （ml） 3.0 3.0 3.0 （三）、酮体的测定 取锥形瓶3只，按编号顺序操作 摇匀，静置10分钟，各管加10%HCl 3ml，然后于每管加0.1%淀粉液2～3滴呈蓝色，分别用0.02N Na2S2O3滴定至蓝色消褪为滴定终点。 计算3瓶酮体含量，并解释结果。 五、【作业】 结果与分析 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。 四、【主要内容】 1．取3个25mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2mL0．1mo1／L的标准甘氨酸溶液和5mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液，再混匀，分别用0.1mo1/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。 2．取未知浓度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。 式中：V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。mo1／LNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。 五、【作业】 选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基？ 结果与分析 实验七 酵母核糖核酸的分离 及组分鉴定 一、【实验目的】 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸的方法 二、【实验仪器与材料】 材料：恒温水浴锅；抽滤瓶；离心机；乳钵；酵母 药品：氢氧化钠；乙醇；盐酸；硫酸；硝酸盐；苔黑酚；钼酸铵；抗坏血酸； 三、【实验原理】 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 利用物质的沉降系统、质量、浮力等不同因素，应用强大的离心力使物质分离的方法称离心法。 四、【主要内容】 将15g酵母悬浮于90mL0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心(3000r／min)15分钟，将上清液缓缓倾入30mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心(3000r／min)3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。 取200mg提取的核酸，加入1.5mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 1．嘌呤碱 取水解液1mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 2．核糖 取1支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0．2mL。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 3．磷酸 取1支试管，加入水解液1mL和定磷试剂1mL。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。 五、【作业】 1．如何得到高产量RNA的粗制品？ 2．本实验RNA组分是什么？怎样验证的？ 实验八 酶的特性 一、【实验目的】 加深对酶的性质的认识 二、【实验仪器与材料】 恒温水浴锅；酵母；唾液；碘液；氯化钠；淀粉；柠檬酸；氯化钠；硫酸铜；硫酸钠；蔗糖；柠檬酸钠 三、【实验原理】 1、淀粉受唾液淀粉酶的作用水解成麦芽糖和少量葡萄糖。通常以测定淀粉水解的程度（底物减少）或麦芽糖生成的数量（产物增加）来衡量淀粉酶的活性。麦芽糖和葡萄糖都具有还原性，能使班氏试剂中的二价铜离子（Cu2+）还原成一价铜离子（Cu+）生成砖红色的氧化亚铜沉淀。而蔗糖不能被水解也不