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技术在玉兰亚属植物分类研究中的应用* *基金项目：深圳市仙湖植物园科研基金资助。 作者简介：王亚玲（1971—），女（汉族），助研，西北农林科技大学在职硕士研究生。 王亚玲，张寿洲，崔铁成 （ 西北农林科技大学，陕西杨陵； 西安植物园，西安；仙湖植物园，深圳） 摘要：对玉兰亚属的个种进行标记实验的结果表明：标记在玉兰亚属内具有很高的多态性，证明标记可作为木兰科低等级分类单元的分类依据。聚类分析结果显示，分布于美洲的渐叶木兰与其它分布于亚洲的种类明显分开，滇藏木兰与亚洲的其余个种也具有较远的亲缘关系，其余各个种各自聚类，种间均有着不同的遗传距离。及分子序列测定分析结果均不支持玉兰亚属以萼片状花被片、开花时间、花被片颜色作为分组的依据，建议玉兰亚属以地理分布特征作为分组依据，建立亚洲组与美洲组两个类群。 关键词：玉兰亚属；标记；分类 ( ; ’ ’ ) . , . . , . . , , . : . ： ； ； 木兰属玉兰亚属( ))植物为落叶乔木或灌木，栽培历史悠久，有许多著名的园林观赏和药用种类。由于该亚属分布范围广，自然杂交容易，形态变异类型多，为该属的分类造成一定的困难。随着分子生物学的发展， 、、基因序列测定等分子生物学手段在植物系统学研究中越来越受到重视。 及、间隔区、、、、、等序列的测定分析也已在木兰科（）植物分子系统学研究中得到应用，在验证了许多解剖学、形态学观点的同时，也提出许多与形态学分类很不相同的系统发育树，对一些传统的分类依据提出了质疑[]。但由于木兰科植物具有原始保守性，序列在本科中进化很慢，碱基变异位点相对其它被子植物变化要少的多，所能提供的信息量较少，使序列分析在木兰科系统研究中的应用受到限制。 （ ）是一种运用随机引物扩增整个基因组，来寻找多态性片段作为分子标记的技术，是一种多态性极高的分子标记手段，被广泛应用于遗传多样性、分子辅助育种、种间或属间遗传关系、品种的分类鉴定、基因定位与分离、构建遗传图谱等方面的研究。技术在木兰科植物的研究上应用不多，遗传多样性方面的研究仅见于观光木属（）、鹅掌楸属（）[]。系统发育研究方面仅应用于含笑亚族（. ）的系统分析，并得出了与序列测定分析基本一致的结果[]。本研究目的在于借助技术来检测玉兰亚属种间的亲缘关系，对经典的形态学分类及现代序列分析结果进行验证。 材料与方法 材料 包括玉兰亚属个种和新发表的个种，种名及来源见表。 表 本研究所用的材料及其来源 编号 中 文 名 拉丁名 来 源 编号 中 文 名 拉丁名 来源 白 玉 兰 华南植物园 日本辛夷 华南植物园 天目木兰 华南植物园 星花玉兰 仙湖植物园 滇藏木兰 华南植物园 柳叶木兰 昆明植物园 凹叶木兰 华南植物园 渐叶木兰 华南植物园 武当木兰 华南植物园 辛 夷 华南植物园 湖北白玉兰 华南植物园 景宁木兰 仙湖植物园 宝华玉兰 华南植物园 伏牛山木兰 仙湖植物园 望春玉兰 仙湖植物园 二乔玉兰 仙湖植物园 黄山木兰 华南植物园 提取 选用新鲜幼嫩的叶片或硅胶快速干燥保存的叶片作为材料，采用改进的法提取[]。每个种采个个体，分别提取后，等量混匀，用λ估算的浓度，并将模板稀释至用于反应。 引物的筛选 从赛百威的字号和上海生工的字号共个引物中筛选出多态性 好、条带亮、清晰无弥散的引物条（表），对所有的样品进行扩增。 编号. 序列 扩增条件 扩增反应在梯度扩增仪上进行，反应体系为μ，包括 ，引物， ，μ聚合酶。扩增程序为：℃，’”—→℃”—→℃，’—→℃，’—→个循环—→℃，’。扩增产物加入溴酚蓝μ，在含 表 本研究所用的引物序列 （溴乙锭）的的琼脂糖凝胶中，用 缓冲液、以的电压电泳